Laporan Praktikum Antiseptik Dan Desinfektan 1g5y5c

LAPORAN PRAKTIKUM FARMAKOLOGI TOKSIKOLOGI II PERCOBAAN V PENGUJIAN ANTISEPTIK ATAU DESINFEKTAN Disusun oleh: Kelompok 6 E Gheavanya Azhari Tamim

10060316202

Risa Apriani Hilyah

10060316203

Miranda Dwi Putri

10060316204

Diah Rohaeni

10060316208

Dwina Syafira Arzi

10060316210

Asisten

: Adela Nursyabani, S.Farm.

Tanggal praktikum

: Selasa, 26 Februari 2019

Tanggal pengumpulan

: Selasa, 5 Maret 2019

LABORATORIUM FARMASI UNIT D PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS ISLAM BANDUNG 1440H / 2019 M

I.

Tujuan Percobaan 1. Menjelaskan perbedaan antara antiseptik, desinfektan dan antibiotic 2. Menjelaskan perbedaan prinsip pengujian antiseptik 3. Menjelaskan perbedaan prinsip dan kegunaan pengujian metode kontak (koefesien fenol) dengan metode difusi agar

II.

Teori Dasar

2.1.

Antiseptik Antiseptik dalah bahan kimia yang digunakan untuk membunuh atau

mencegah pertumbuhan mikrootganisme, biasanya merupakan sediaan yang digunakan pada jaringan hidup. Tujuan utama pemakaian antiseptik adalah untuk membunuh

atau

menghambat

pertumbuhan

bakteri

dengan

mekanisme

penghambatan system enzim bakteri dan mengubah daya permeabilitas sel membran melalui proses oksidasi, halogenasi dan pengendapan bakteri. (Levinson, 2008). Antiseptik atau germisida adalah senyawa kimia yang digunakan untuk membunuh atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme pada jaringan yang hidup seperti pada permukaan kulit dan membran mukosa. Antiseptik berbeda dengan antibiotik dan disinfektan, yaitu antibiotik digunakan untuk membunuh mikroorganisme di dalam tubuh, dan disinfektan digunakan untuk membunuh mikroorganisme pada benda mati. Hal ini disebabkan antiseptik lebih aman diaplikasikan pada jaringan hidup daripada disinfektan. Namun, antiseptik yang kuat dan dapat mengiritasi jaringan kemungkinan dapat dialih fungsikan menjadi disinfektan contohnya adalah fenol yang dapat digunakan baik sebagai antiseptik maupun disinfektan. Penggunaan antiseptik sangat direkomendasikan ketika terjadi epidemi penyakit karena dapat memperlambat penyebaran penyakit. (Retnosari dan Isadiartuti 2006). 2.1.1. Mekanisme antiseptik Mekanisme kerja antiseptik antara lain merusak lemak pada membrane sel bakteri atau dengan cara menghambat salah satu kerja enzim pada bakteri yang berperan dalam biosintesis asam lemak. (Isiadirtuti dan Retno, 2005).

Menurut Siswandono dan Surkadjo, mekanisme kerja antiseptik antara lain menginaktifkan enzim, denaturasi protein, mengubah permeabilitas membrane, interkalasi kedalam Deoksiribo Nukleat Acid (DNA) dan pembentukan kelat. a.

Penginaktivasi enzim Penginaktivasian enzim adalah mekanisme umum dari senyawa antiseptik,

seperti turunan aldehid, etilen oksida. Aldehid dan etilen oksida bekerja dengan mengalkilasi secara langsung gugus nukleofil seperti gugus-gugus amino, karboksil, hidroksil, fenol dan tiol dari protein sel bakteri. (Siswandono dan Soekardjo, 2000). b. Denaturasi protein Turunan fenol berinteraksi dengan sel bakteri melalui proses absorbs yang melibatkan ikatan hydrogen. Pada kadar rendah terbentuk kompleks protein-fenol dengan ikatan yang lemah dan segera mengalami peruraian, diikuti penetrasi fenol kedalam sel menyebabkan presipitasi serta denaturasi protein. Pada kadar tinggi fenol menyebabkan koagulasi protein dan sel membrane mengalami lisis. (Siswandono dan Soekardjo, 2000). c. Mengubah permeabilitas Turunan fenol dapat mengubah permeabilitas membrane sel bakteri , sehingga

menimbulkan

kebocoran

konstituen

sel

yang

esensial

dan

mengakibatkan bakteri mengalami kematian. (Siswandono dan Soekardjo, 2000). d. Interkalasi kedalam Dioksiribo Nukleat Acid (DNA) Turunan tirfenil metan seperti gentian violet adalah kation aktif, dapat berkompetisi dengan ikatan hydrogen membentuk kompleks yang tak terionisasi dengan gugus bermuatan negative dari konstituen sel, terjadi pemblokan proses biologis yang penting untuk kehidupan bakteri sehingga bakteri mengalami kematian. (Siswandono dan Soekardjo, 2000). e. Pembentukan kelat Beberapa turunan fenol seperti heksaklorofen dan oksikuinolin, dapat membentuk kelat dengan ion Fe dan Cu, kemudian bentuk kelat tersebut dialihkan kedalam sel bakteri. Kadar yag tinggi dari ion-ion logam didalam sel

menyebabkan

gangguan

fungsi

enzim-enzim

sehingga

mikroorganisme

mengalami kematian. (Siswandono dan Soekardjo, 2000). 2.1.2. Penggolongan antiseptik Menurut siswandono (1995), antiseptik dapat digolongkan menjadi beberapa golongan yaitu : 1.

Golongan halogen dan halogenofor

2.

Golongan fenol

3.

Turunan alkohol

4.

Senyawa pengoksidasi

5.

Turunan ammonium kuartener

2.2.

Desinfektan Desinfektan merupakan bahan kimia yang digunakan untuk mencegah

terjadinya infeksi dengan membunuh jasad renik (bakterisid), terutama pada benda mati. Proses desinfeksi dapat menghilangkan 60% - 90% jasad renik. Desinfektan digunakan secara luas untuk sanitasi baik di rumah tangga, laboratorium, dan rumah sakit (Shaffer, 1965; Larson, 2013). Kriteria suatu desinfektan yang ideal adalah bekerja dengan cepat untuk menginaktivasi mikroorganisme pada suhu kamar, berspektrum luas, aktivitasnya tidak dipengaruhi oleh bahan organik, pH, temperatur, dan kelembaban, tidak toksik pada hewan dan manusia, tidak bersifat korosif, bersifat biodegradable, memiliki kemampuan menghilangkan bau yang kurang sedap, tidak meninggalkan noda, stabil, mudah digunakan, dan ekonomis (Siswandono, 1995; Butcher and Ulaeto, 2010). Faktor-faktor yang mempengaruhi aktivitas desinfektan yang digunakan untuk membunuh jasad renik adalah ukuran dan komposisi populasi jasad renik, konsentrasi zat antimikroba, lama paparan, temperatur, dan lingkungan sekitar (Pratiwi, 2008). 2.2.1. Penggolongan desinfektan Menurut Siswandono (1995), desinfektan dapat dibagi menjadi enam kelompok, yaitu: 1.

Turunan aldehida

2.

Turunan alkohol

3.

Senyawa pengoksidasi

4.

Turunan fenol

5.

Turunan ammonium kuartener

2.3.

Metode koefesien fenol dan metode kontak Koefisien fenol merupakan kemampuan suatu desinfektan dalam

membunuh bakteri dibandingkan dengan fenol. Uji ini dilakukan untuk membandingkan aktivitas suatu produk (desinfektan) dengan fenol baku dalam kondisi uji yang sama. Fenol dijadikan standar dalam uji efektivitas desinfektan karena kemampuannya dalam membunuh jasad renik sudah teruji. Penentuan koefisien fenol adalah untuk mengevaluasi kekuatan anti mikroba suatu desinfektan dengan memperkirakan efektivitasnya berdasarkan konsentrasi dan lamanya kontak terhadap mikroorganisme tertentu (Dwijoseputro, 1982; Somani, et al., 2011). Pengujian desinfektan

yang baik

harus mampu memprediksikan

kekuatannya ketika digunakan. Desinfektan digunakan untuk pemeliharaan permukaan, peralatan-peralatan, air, kain linen, obat-obatan, bidang pertanian, dan industri makanan. Uji yang vlebih spesifik telah dikembangkan untuk memberikan gambaran keefektifan suatu desinfektan. Metode pengujian desinfektan meliputi uji pembawa, uji suspensi, uji kapasitas, dan uji praktik (Cremieux dan Fleurette, 1991; Reybrouck, 1992). Metode kontak merupakan modifikasi dari koefesien fenol yaitu untuk melihat potensi antiseptik dari sediaan uji dengan menilai waktu yang dibutuhkan untuk suatu bahan uji dapat menghambat pertumbuhan mikroba dibandingkan terhadap bahan standar. (Dwijoseputro, 1982; Somani, et al., 2011).

III.

Alat dan Bahan Alat

Bahan

Mikroba Uji

4. Autoklaf

Medium:

17. Escherichia coli

5. Batang

Nutrien agar

18. Staphylococcus aureus

pengaduk

Bahan lain:

6. Bunsen

15. Aquadest

7. Cawan petri

16. Larutan uji

8. Gelas piala 9. Inkubator 10. Jarum ose 11. Labu Erlenmeyer 12. Pipet ukur 13. Tabung reaksi 14. Vortex

IV.

Prosedur

4.1.

Persiapan Praktikum

a.

Sterilisasi alat dan media pertumbuhan bakteri Sterilisasi alat dan media pertumbuhan bakteri dilakukan dengan cara

panas lembab menggunakan autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit dan jarum ose disterilisasi dengan cara fikasasi pada nyala api bunsen b.

Penyiapan media pertumbuhan bakteri Nutrient agar (NA) dibuat dengan melarutkan 4,4 gram serbuk NA dalam

air suling steril sebanyak 220 ml. Kemudian dipanaskan hingga larut dalam labu Erlenmeyer, disumbat dengan kapas berlemak dan ditutup dengan aluminium foil lalu disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit. c.

Penyiapan bakteri uji Bakteri uji yang digunakan yaitu E. Coli dan S. aureus dibiakan pada

aquadest steril. Diambil 10 mL aquadest steril dimasukan ke dalam tabung reaksi,

biakan bakteri diambil menggunakan jarum ose ke dalam tabung reaksi berisi aquadest kemudian di vortex sampai keruh. 4.2.

Hari Praktikum Tabung reaksi disiapkan sebanyak 6 buah dan beri nama (t15 detik, t30

detik, t45 detik, t60 detik, t75 detik dan t90 detik). Kemudian media agar sebanyak 15 mL dimasukan kedalam cawan petri sebanyak 6 buah dan beri nama (t15 detik, t30 detik, t45 detik, t60 detik, t75 detik dan t90 detik). Desinfektan dimasukan kedalam tabung reaksi sebanyak 5 mL pada masing-masing tabung reaksi. Kemudian ditambahkan 1 tetes bakteri kedalam tabung, dikocok sampai tercampur merata. Jarum ose dimasukan kedalam tabung pada interval 15, 30, 45, 60, 75 dan 90 detik dengan teknik aseptis. Selanjutnya jarum ose dioleskan ke permukaan agar dalam cawan petri. Seluruh biakan diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam. V.

Data Pengamatan

5.1.

Tabel pengamatan pengujian antiseptik atau desinfektan Bahan Uji Larutan 1 Larutan 2 Larutan 3 Larutan 4 Larutan 5 Larutan 6 Standar

Pertumbuhan pada sub biakan (cawan petri) dalam detik 15 30 45 60 75 90 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

5.2.Gambar pengamatan pengujian antiseptik atau desinfektan Kelompok

1

Gambar Pengamatan

2

3

4

5

6

7

VI.

Pembahasan Pada praktikum kali ini bertujuan untuk menguj sampel atau larutan uji

uk kedalam desinfektan atau antiseptik dengan metode difusi agar. Sebelum melakukan percobaan, dilakukan proses sterilisasi pada alat-alat dan media yang akan digunakan dengan menggunakan autoklaf. Hal ini bertujuan untuk menghindari terjadinya kontaminasi mikroorganisme lain yang menggangu hasil pengamatan. Semua pekerjaan dilakukan dengan teknik aseptis untuk mencegah terjadinya kontaminasi dengan biakan yang mungkin bersifat patogen. Prosedur kerja aseptis dilakukan dengan beberapa cara, pertama sanitasi alkohol pada meja tempat melakukan penanaman mikroba menggunakan alkohol 70%. Penggunaan alkohol pada konsenrasi 70% lebih efektif digunakan karena tidak membunuh semua mikroorganisme (tidak langsung mendenaturasi bakteri) tetapi hanya mengurangi mikroorganisme sampai tingkat level tertentu. Kedua, pekerjaan dilakukan diantara dua nyala api bunsen dengan jarak ± 20 cm untuk meminimalkan kontaminasi serta melindungi praktikan dari mikroorganisme patogen maupun non patogen. Penyalaan bunsen selama 10 menit sebelum bekerja bertujuan agar terjadi radiasi yang menyebabkan mikroorganisme yang tidak

diinginkan menjauh. Ketiga, memflambir alat-alat yang digunakan untuk menjaga kesterilan atau menghindari kontaminan mikroorganisme yang lain. Media yang digunakan pada percobaan kali ini adalah media agar (Nutrient agar), karena NA merupakan media umun yang berfungsi untuk membiakan berbagai macam mikroorganisme serta kultur bakteri. Kandungan ekstrak daging dan pepton pada NA merupakan sumber nutrisi (berupa protein, nitrogen, vitamin serta karbohidrat) yang sangat dibutuhkan oleh mikroorganisme untuk tumbuh dan berkembang. Selain itu kandungan NaCl dalam NA berfungsi untuk menyeimbangkan tekanan osmotik sel bakteri dan medium, agar bakteri yang akan ditumbuhkan tidak mati. Pengambilan suspensi bakteri yang telah dimasukan kedalam beberapa sampel larutan yang duga desinfektan dan antiseptik dilakukan dengan menggunakan jarum ose yang telah diflambir harus didiamkan beberapa detik agar suhunya sedikit turun, hal ini bertujuan agar bakteri tidak mati akibat suhu yang terlalu tinggi. Setiap kali jarum ose kontak dengan bakteri harus dibersihkan dahulu dengan alkohol 70% agar terhindar dari kontaminasi dan tetap dalam keadaan steril. Penyimpanan bakteri dalam inkubator (proses inkubasi) pada suhu 37oC dilakukan karena suhu 37oC merupakan suhu optimum untuk pertumbuhan bakteri. Pada pengujian antiseptik dan desinfektan kali ini dilakukan mengunakan pengujian metode kontak dengan metode difusi agar, dimana parameter pengamatan berupa ada tidak nya pertumbuhan mikroba. Dengan metode kontak ini dapat menunjukan waktu yang dibutuhkan untuk suatu bahan uji dapat menghambat pertumbuhan mikroba dibandingkan terhadap bahan standar. Prinsip metode difusi agar yaitu proses difusi zat antimikroba (antiseptik dan desinfektan) yang telah dicampur dengan bakteri pada lempeng agar. Kelibihan metode kontak dibandingkan metode koefisien fenol dan difusi agar yaitu minim kontaminasi, lebih mudah dilakukan. Kekurangannya adalah Penggunaan antiseptik biasanya digunakann untuk untuk mencegah penyebaran infeksi berbahaya. Senyawa kimia digunakan pada kulit atau membran mukosa. Syarat yang haru dipenuhi adalah memiliki kemampuan

antimikroba, tidak toksik dan tidak mengiritasi kulit dengan cara destruksi atau inhibisi mikroorganisme pada jaringan hidup. Sedangkan desinfektan digunakan untuk melenyapkan atau menghilangkan

mikroorganime, termasuk yang

patogen, dari permukaan benda tidak hidup. Desinfeksi tidak membunuh semua mikroorganisme tetapi hanya mengurangi sampai tingkat level tertentu Berdasarkan hasil pengamatan setelah proses inkubasi selama 18-24 jam diperoleh data, larutan standar yaitu alkohol menunjukan hasil (-) atau tidak terdapat pertumbuhan mikroba pada waktu 15,45 dan 60 detik, hal ini menunjukan bahwa larutan standar dapat membunuh mikroba karena alkohol bekerja membunuh mikroba dengan cara menghidrasi/ mengeluarkan air dari sel bakteri (sebagai antiseptik) dan mendenaturasi protein dasi sel bakteri (sebagai desinfektan). Tetati pada waktu 15, 75 dan 90 detik menunjukan hasil (+) atau terdapat pertumbuhan mikroba, hal ini terjadi karena kemungkinan terdapat kontaminan. Hasil pengamatan larutan 1 menunjukan hasil (-) atau tidak terdapat pertumbuhan mikroba dalam waktu 30 detik, larutan 5 menunjukan hasil (-) dalam waktu 60, hal ini menunjukan bahwa larutan 1 dapat membunuh mikroba dan diduga desinfektan karena jika dibandingkan dengan larutan standar waktu yag dibutuhkan untuk memunuh bakteri sangat sacepat. Hasil pengamatan larutan 2,4, dan 6 menunjukan hasil (+) atau terdapat pertumbuhan mikroba, hal ini menunjukan bahwa dalam waktu 90 larutan tersebut tidak dapat membunuh atau mengahambat mikroba atau dalam kata lain untuk membunuh mikroba tersebut membutuhkan waktu yang lebih lama sehingga ketiga larutan tersebut diduga merupakan antiseptik. Hasil pengamatan larutan 3 menunjukan hasil (-) atau tidak terdapat pertumbuhan mikroba dalam waktu 30-45 detik hal ini menunjukan bahwa larutan 1 dapat membunuh mikroba dan diduga desinfektan karena jika dibandingkan dengan larutan standar waktu yag dibutuhkan untuk memunuh bakteri sangat sacepat. Tetati pada waktu 15, 60, 75 dan 90 detik menunjukan hasil (+) atau terdapat pertumbuhan mikroba, hal ini terjadi karena kemungkinan terdapat kontaminan.

Kesimpulan Berdasarkan hasil percobaan dapat disimpulkan bahwa pengujian antiseptik dan desinfektan dengan metode kontak menunjukan bahawa larutan 1,3,5 diduga merupakan desinfektan dilihat dari waktu yang dibutuhkan untuk membunuh mikroba lebih cepat dibandingkan larutan 2,4, dan 6 yang diduga sebagi antiseptik.

DAFTAR PUSTAKA Aboh, M., Oladosu, P., dan Ibrahim, K. (2013). Antimicrobial Activities of Some Brands of Households Disinfectants Marketed in Abuja Municipal Area Council, Federal Capital Territory. Nigeria: American Journal of Research Communication. Butcher, W & Ulaeto, D. 2010. Inactivation of Orthopoxviruses by Household Disinfectants. Philadelphia: Department of Biomedical Sciences, Dstl Porton Down. Brewer, C. (2010). Variations in Phenol Coefficient Determinations of Certain Disinfectants. American Journal of Public Health. Cremieux, A., and Fleurette, J. (1991). Methods of Testing Disinfectants. In Disinfection, Sterilization, and Preservation. Edisi empat. Philadelphia: Lea dan Febiger. Dwidjoseputro. (1982). Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Penerbit Djambatan. Elisabeth, R., Apriliana, E., dan Rukmono, P. (2012). Uji Efektivitas pada Antiseptik di Unit Perinatologi Rumah Sakit Umum Abdul Moeloek Bandar Lampung. Medical Journal of Lampung University. Fazlara, A and Ekhtelat, M. (2012). The Disinfectant Effects of Benzalkonium Chloride on Some Important Foodborne Pathogens. American-Eurasian Journal of Agricultural & Environment Scientifique. Ghanem, K.M., Fassi, F.A., and Hazmi, N.M. (2012). Optimization of Chloroxylenol Degradation by Aspergillus niger Using Plackett- Burman Design and Response Surface Methodology. African Journal of Biotechnology. Kahrs, R.F. (1995). Disinfectants, Antiseptics, Sanitizers, and Sterilizing Agents. Revue Scientifique et Technique de L’ Office International Des Epizooties.

Larson, E., (2013). Monitoring Hand Hygiene. American Journal of Infection Control. Levinson W. (2008). Review of medical microbiology and immunology. 10th ed. McGraw-Hill Companies. Pratiwi, S.T., (2008). Mikrobiologi farmasi. Jakarta: Erlangga. Reybrouck, G. (1992). The Assesment of the Bactericidal Activity of Surface Disinfectants. Edisi pertama. Oxford: Zentralblatt fur Hygiene und Umweltmedizin. Sari, Retno., Dewi I. and Noorma R., (2004). Pemanfaatan Sirih sebagai Sediaan Hand Gel Antiseptic : I. Studi Formulasi, Laporan Penelitian, Fakultas Farmasi,Universitas Airlangga. Siswandono dan Soekardjo, B., (1995). Kimia Medisinal, 28-29, 157, Airlangga University Press, Surabaya. Siswandono dan Soekardjo, B., (2000). Kimia Medisinal, Edisi 2, 228-232, 234, 239, Airlangga University Press, Surabaya. Shaffer, J.G., (1965) The Role of Laboratory in Infection Control in the Hospital. Arbor: University of Michigan, School of Pulbic health. Somani, S.B., Ingole, W.N., and Kulkarni, S.N. (2011). Disinfection of Water by Using Sodiun Chloride (NaCl) and Sodium Hypochlorite (NaOCl). Shegaon: Shri Sant Gajanan Maharaj College of Engineering. Stampi, S., De Luca, G., Onorato, M., Ambrogiano, E., and Zanetti, F. (2002). Peracetic Acid as an Alternative Wastewater Disinfectant to Chlorine Dioxide. Bologna: Department of Medicine