Metodos De Siembra 6s314j

Metodos de siembra Diferentes Métodos de Siembra: Sembrar: Es el acto de colocar el material bacteriológico en el medio de cultivo para promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicación. El resultado de una siembra se llama: Cultivo Las siembras pueden ser: 1.- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez. 2.- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria. Métodos Generales: 1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados. -

Medio de cultivo: Liquido Instrumento: Asa Finalidad: poner la bacteria en suspensión. 2) Siembra por estrías en superficie: Se siembra el material en la superficie de el agar inclinado en un tubo de ensayo, allí se extiende por toda la superficie con el asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la superficie inclinada y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del tubo.

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Medio de cultivo: agar base inclinado Instrumento: asa o aguja bacteriológica. 3) Siembra por estría por agotamiento: Con éste procedimiento se puede conseguir una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogéneo y se descarga sobre la superficie del medio formando estrías. Esto puede realizarse de varias formas: a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías. Cuando se quiere obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo cual se repite la operación sin tomar con el asa nuevo material. b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una estría luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en el último cuadrante aparecerán las colonias aisladas. c- El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa, próxima al borde, se esteriliza el asa y se traza otra estría a partir del depósito y así sucesivamente.

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Medio de cultivo: solido en placa de Petri Instrumento. Asa

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Finalidad. Obtener colonias aisladas

4) Por picadura o punción: Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias. -

Medio de cultivo: Semisólido Instrumento: aguja bacteriológica Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias 5) Siembra en TSI: (Por picadura y estrías en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el rojo fenol. En este medio sembraremos por picadura y estrías en superficie, como ya conocemos, para estudiar los cambios que ocurrirán en superficie y profundidad. A lo largo del canal se desarrollan los microorganismos, y según lo hagan en la parte superior o inferior del tubo, estarán indicando su comportamiento frente a los azucares, los cambios indican lo siguiente:

INTRODUCCIÓN Un cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones físicas,químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. Engeneral, podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos en función de las característicasdel medio y cultivos discontinuos y continuos en función de la disponibilidad denutrientes en el medio. OBJETIVOS

Comparar los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tiposde microorganismos. Conocer los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos demicroorganismos. 3. MARCO TEORICO Diferentes métodos de siembra - Sembrar : Es el acto de colocar el material bacteriológico en el medio de cultivo para promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicación.El resultado de una siembra se llama : Cultivo · Las siembras pueden ser: - Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez - Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria Métodos Generales: 1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldosimple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargadacon el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados. Medio de cultivo: Liquido Instrumento : Asa Finalidad : poner la bacteria en suspensión Diluciones sucesivas Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas células que, tras inocularse enun medio de cultivo, generen colonias aisladas. 2) Siembra por estrías en superficie: Se siembra el material en la superficie del agarinclinado en un tubo de ensayo, allí se extiende por toda la superficie con el asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendoestrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la superficie inclinada y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del tubo.Medio de cultivo: agar base inclinado Instrumento: asa o aguja bacteriológica 3) Siembra por estría por agotamiento: Con éste procedimiento se puedeconseguir una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogéneo y se descarga sobrela superficie del medio formando estrías. Esto puede realizarse de varias formas: aAl comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías. Cuando se quiereobtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo cualse repite la operación sin tomar con el asa nuevo material. bSe puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado elmaterial en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una estríaluego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en elúltimo cuadrante aparecerán las colonias aisladas c-

El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa, próxima al borde, seesteriliza el asa y se traza otra estría a partir del depósito y así sucesivamente. Medio de cultivo: solido en placa de Petri Instrumento. Asa Finalidad. Obtener colonias aisladas

4) Por picadura o punción : Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar yse lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo,formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método seutiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.Medio de cultivo. Semisólido Instrumento: aguja bacteriológica Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias 5) Siembra en TSI: (Por picadura y estrías en superficie) : el TSI (Triple Sugar Iron)es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es elrojo fenol.En este medio sembraremos por picadura y estrías en superficie, como ya conocemos, para estudiar los cambios que ocurrirán en superficie y profundidad. A lo largo del canalse desarrollan los microorganismos, y según lo hagan en la parte superior o inferior deltubo, estarán indicando su comportamiento frente a los azucares, los cambios indican losiguiente:

Crecimiento microbiano en medio líquidoSi la bacteria crece en un medio líquido, en la mayoría de los casos las células que se producen en cada división continúan su vida independientemente formándose unasuspensión de células libres.En un cultivo discontinuo de bacterias en medio líquido, se pueden diferenciar cuatrofases en la evolución de los parámetros que miden el crecimiento microbiano:1.- Fase lag o de adaptacióndurante que los microorganismos adaptan su metabolismo alas nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y condiciones de cultivo) para iniciar la fase de crecimiento exponencial.2.- Fase exponencial o logarítmica:en ella la velocidad de crecimiento es máxima yel tiempo de generación es mínimo. Durante esta fase las bacterias consumen avelocidad máxima los nutrientes del medio. La evolución del

número de células duranteesta fase se explica con los modelos matemáticos que describiremos a continuación. 3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el número de bacterias (ni la masa uotros parámetros del cultivo). Las células en fase estacionaria desarrollan unmetabolismo diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce unaacumulación y liberación de metabolitos secundarios que pueden tener importanciaindustrial.Los microorganismos entran en fase estacionaria porque se agota algún nutrienteesencial del medio o porque los productos de desecho que han liberado durante la faseexponencial hacen que el medio sea inhóspito para el crecimiento microbiano.La fase estacionaria tiene gran importancia porque probablemente represente conmayor fidelidad el estado metabólico real de los microorganismos en los ambientesnaturales. 4.- Fase de muerte:se produce una reducción del número de bacterias viables del cultivo

Crecimiento microbiano en medio sólido Las fases, parámetros y cinética de crecimiento discutidas para el caso de los cultivoslíquidos se presentan también en cultivos sólidos. La cinética de crecimiento, en estecaso, se puede estudiar siguiendo la evolución del número de células viables por unidadde superficie o por unidad de masa.Cuando una célula aislada e inmóvil comienza a crecer sobre un substrato sólido, elresultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Por consiguiente, sedenomina unidad formadora de colonia (UFC) a una célula bacteriana viva y aislada que si se encuentra en condiciones de substrato y ambientales adecuadas da lugar a la producción de una colonia en un breve lapso de tiempo. Si el número inicial de bacterias por unidad de superficie es muy alto, la confluencia de las colonias da lugar a lo que sellama un césped cuando se realizan los cultivos en placas de laboratorio.En el caso de microorganismos móviles (deslizantes) o en el de los hongos filamentososque tienen un crecimiento trófico no se producen colonias aisladas sino formacionesmás difusas o miceliares. 4. MATERIALES  medio de cultivo ya preparado  asa de siembra  mechero

 tubo de ensayo 1ml de agua destilada y 9ml de chica de jora 1/10 5. PROCEDIMIENTO Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón.  Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz paraescribir.  Introduzca el asa de alambre de platino o nicrón directamente en la zona de colorazul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente, proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto.  Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo deque el asa se enfríe.  Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que serásembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado.  Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cuña entubo de ensayo, proceda del siguiente modo:  Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior.  Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapón dealgodón o la tapa de rosca y reténgala(no colocar el tapón o la tapa sobre la mesade trabajo)  Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces porla llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración, losmicroorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parteexterna del tubo. Esta acción calórica, provoca además una convección delmovimiento del oxígeno presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a ladesigualdad de calor, lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminación.  Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta elfondo de la cuña. A partir de este momento, la siembra puede realizarse dediferentes maneras, en dependencia del tipo de microorganismo que pretendemos que se desarrolle en ese medio de cultivo:

 Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña,trazando una línea longitudinal. 

Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba,imprimiéndole un movimiento de zigzag.  Motiando toda la superficie de la cuña con hisopo.  Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmenteroturando el medio con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal.  Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero. Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa de Petri, proceda de la siguiente manera: Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de manera que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa. Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma dezigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda lasuperficie.  Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj, procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento.  Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de maneraque las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para elsegundo.  Repita esta operación una o dos veces más.  Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo.  Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes dedejarla en el puesto de trabajo.  Rotular y guardar para la incubación 6. CONCLUSIONES Una vez que ya tenemos los medios de cultivo preparados, hay que inocularlos, y paraello se necesita: Medio de cultivo. Condiciones óptimas de incubación como temperatura, pH, presión, condicionesatmosféricas (concentración de O2).Estos medios de cultivo son sólidos (cultivos en reposo), o líquidos (para cultivos enagitación)Al realizar una siembra de microorganismos, debemos tener en cuenta que técnica se vaa utilizar, debido a que estas varían respecto a las características del microorganismo atratar. También debe tenerse en cuenta la forma, espacio y el objetivo al que se quierellegar, pues dependiendo de esto la técnica de siembra es diferente. Un

microorganismose puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar .Uncultivo de bacterias o de hongos es con el fin de aislarlas en el medio para lograr unmejor estudio de ellos.