Medios De Cultivo Metodos De Siembra 6q4q3n

OBJETIVOS

 Facilitar

el crecimiento y el aislamiento de las bacterias presentes en una muestra clínica.

 Determinar

qué bacterias entre las que se desarrollan tienen más probabilidades de ser las causantes de la infección y cuales son sus posibles contaminantes o colonizadores.

 Obtener

un desarrollo suficiente de las bacterias de importancia clínica para permitir su identificación y su caracterización.  CULTIVO PURO  CULTIVO MIXTO  CULTIVO CONTAMINADO

DEFINICIÓN  Sustrato sólido, líquido o semisólido que contiene todos los nutrientes necesarios para el crecimiento y desarrollo de los gérmenes.  Fuentes de energía, carbono, nitrógeno, fósforo, azufre y varios minerales.  pH Luz

Temperatura  Esterilidad absoluta (salvo excepciones)  Recipientes adecuados

Es importante destacar que la transición exitosa de un microorganismo in vivo a un ambiente in vitro va a depender de: Disponibilidad de nutrientes esenciales

Condiciones ambientales adecuadas pH Temperatura Oxígeno y CO2 Presión Luz

SÓLIDOS LÍQUIDOS

SEMISÓLIDOS

Clasificación de los medios de cultivo según consistencia

semisólido

Caldo nutritivo

Caldos de enriquecimiento

Caldos revitalizadores

Enriquecimiento Nutritivo

Selectivo y diferencial

Clasificación de los medios de cultivo según utilización

MEDIOS NUTRITIVOS

Contienen nutrientes que favorecen el desarrollo de la mayoría de los microorganismos sin requerimientos especiales de cultivo.

No promueven el crecimiento de ningún agente en particular

MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO

MEDIOS SELECTIVOS

Contienen uno o más agentes que inhiben el crecimiento de los microorganismos que no se quieren estudiar

Agentes inhibidores: colorantes, sales biliares, alcoholes, ácidos y antibióticos

MEDIOS DIFERENCIALES

Contienen un factor o factores que permite que las colonias de una especie o un tipo bacteriano exhiban ciertas características metabólicas o de cultivo que puedan utilizarse para diferenciarlas de otras bacterias que crecen en el mismo agar

MEDIOS ESPECIALES

MEDIOS CROMÓGENOS MEDIOS DE TRANSPORTE MEDIOS DE CONSERVACIÓN

Sustancias cromogénicas: - Son productos químicos de síntesis que son incoloros cuando se unen a sustratos naturales por enlaces que son hidrolizados por enzimas microbianas específicas. - Cuando la enzima microbiana hidroliza el enlace, se libera el compuesto cromogénico, que adquiere un color intenso.

- Ejemplo: Cromo agar (agentes uropatógenos), se pone en evidencia la actividad enzimática de la Bglucoronidasa o B- galactosidasa de las bacterias formándose colonias de diferentes colonias según la especie. - Identificación presuntiva, haciendo innecesaria la realización de pruebas bioquímicas.

Medios para bacterias no exigentes - agar - extracto de carne - peptona

- NACL - leche descremada (congelar cepas)

NORMATIVA ISP, entregar

CONTROL DE CALIDAD  El Control de Calidad en la preparación y evaluación de

los medios de cultivo es considerado como una esencial y buena práctica de laboratorio, necesaria para mantener el nivel y la ejecución de cualquier técnica microbiológica. Proceso continuo que se extiende desde las materias primas ; a través del productor hasta el producto final utilizado en los diferentes departamentos de análisis y diagnóstico microbiológico.

▪ Recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés (Productividad) ▪ Inhibición o suspensión de los microorganismos no deseados. (Selectividad) ▪ Propiedades bioquímicas (diferenciales y diagnósticas) ▪ Propiedades físicas (por ejemplo, pH, Volumen) ▪ Sea estéril .... etc.  El Jefe inmediato responsable del área * Deberá analizar mensualmente los resultados de las pruebas realizadas por el responsable del departamento de control de calidad * Evaluará el cumplimiento de objetivos a través de los resultados

CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS. Se evalúa utilizando criterios objetivos del medio respecto a:  La recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés  La inhibición o supresión de los microorganismos no deseados tiene que ser cuantitativa  Los atributos ( por ejemplo: Propiedades físicas y bioquímicas)  Rajadura del plato o envase  Variaciones en el volumen del medio  Hemólisis  Cristales en el medio  Presencia de burbujas  Presencia de coágulos  Cambio de color normal  Contaminación  Falla en la inhibición de microorganismos saprofitos  Esterilidad

PRUEBAS FUNCIONAMIENTO  Para evaluar cada lote de medio de cultivo que sea recibido en el laboratorio, se emplean cepas patrones (ATCC) de varios géneros y especies de acuerdo al medio de cultivo a analizar.  El control del funcionamiento consistirá en comprobar:  capacidad del medio de recuperar un bajo número de los microorganismos más sensibles para los que ha sido preparado.  capacidad de inhibir un alto número de los microorganismos que deben ser inhibidos en caso de los medios selectivos y diferenciar los microorganismos para los que ha sido diseñado en caso de los medios diferenciales.

RECONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO DESHIDRATADO • Cumplir con las instrucciones de preparación del medio de cultivo

indicado en la etiqueta del envase • Cumplir con los procedimientos técnicos de fórmulas enviadas por el cliente • Utilizar agua destilada de calidad • Determinar el pH del M de C • Esterilización del medio de cultivo

• Procedimiento escrito • Control de esterilidad del Medio de Cultivo

AGAR INFUSION DE CARNE

MEDIO DE LOWENSTEIN JENSEN

AGAR SANGRE

ERRORES EN LA PREPARACIÓN Apelmazamiento del producto deshidratado DEFECTO  El envase no fue cerrado correctamente después de su uso. El envase permaneció abierto por largo rato.  Apelmazamiento del  Producto deshidratado El producto sobrepasó la fecha de vencimiento. 

El valor de pH no coincide con el indicado • No fue empleada agua destilada • El medio fue sobrecalentado durante su preparación Phde nopH fue correctamente  •El El valor nodeterminado coincide El el medio estaba vencido.  •Con indicado

Aparición de turbiedad o precipitados:  El medio preparado perdió agua por evaporación  El medio se calentó en exceso  El medio no se calentó lo suficiente.  No fue empleada la cantidad del medio o suplemento recomendada.

El color del medio no coincide con el indicado:  El medio fue sobrecalentado durante su preparación.  El pH no fue ajustado correctamente.  El recipiente empleado estaba sucio.  Los azúcares contenidos en el medio se caramelizaron

El gel se obtiene más blando que lo característico para el medio:  No fue garantizada la disolución total del agar durante la preparación del medio.  No fue empleada la cantidad del medio recomendada o se añadió agua en exceso.

El crecimiento de los microorganismos es pobre:  El medio fue sobrecalentado  El valor del pH no fue ajustado correctamente.  La adición de suplementos al medio se efectuó a excesiva temperatura.  El medio no fue mezclado correctamente.

El crecimiento de los microorganismos es atípico:

 Quedaron

residuos de sustancias inhibidoras del crecimiento no deseables, en los recipientes donde se preparó o distribuyó el medio.  El medio de cultivo fue preparado de manera incorrecta.  El producto sobrepasa la fecha de vencimiento.

ES, POR LO TANTO, MUY IMPORTANTE QUE EL TECNÓLOGO MÉDICO SEA QUIEN SUPERVISE Y CONTROLE TODOS LOS FACTORES NECESARIOS EN LA PREPARACIÓN Y CONSERVACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO, PARA ASÍ LOGRAR AISLAR E IDENTIFICAR CON EXCELENCIA LOS DISTINTOS AGENTES MICROBIANOS.

Microbiología, Prescott´s

Microbiología, Prescott´s

Los métodos de siembra se utilizan para inocular por distintos métodos sobre un medio de cultivo apropiado una muestra que contenga bacterias con el fin de reproducirlas para aumentar el número de individuos de la población y formar colonias en el caso de medios sólidos.

I. Siembra con rastrillo

II. Siembra con asa de cultivo - Diseminación en superficie - Agotamiento en superficie - Tubos en superficie - Tubos en profundidad o picada

III. Siembra con tórula

Figura 12: Siembra con rastrillo Manual de microbiología 2011, U. Mayor

Figura 13: Siembra de diseminación en superficie Manual de microbiología 2011, U Mayor

Figura 14: Siembra semi-cuantitativa de agotamiento en superficie. Manual de microbiología 2011, U Mayor

Figura 15: Siembra de tubo en superficie.

Manual de microbiología 2011, U Mayor

Figura 16: Siembra de tubo profundidad.

Manual de microbiología 2011, U Mayor

 Pared celular bacteria gram

positiva y gram negativa Gram positiva

Gram negativa

Gram negativa

de Braun

Gram positiva

1 minuto

Decolorar con alcohol- 15segund os acetona

1 minuto

30 segundo s

DIRECTOS

Primera aproximación al posible diagnóstico

Técnicas rápidas y baratas Diagnósticos rápidos y certeros

EXAMEN AL FRESCO MATERIA GENITAL Secreción Semen, vaginal secreción y/o uretral prostática

Orina de primer chorro

LEVADURAS BACTERIAS

CLUE CELLS LEUCOCITOS TRICHOMONAS