Inmunologia 1616k
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- Words: 1,284
- Pages: 60
INMUNOLOGIA DIAGNOSTICO LABORATORIAL
La inmunología laboratorial es el estudio del sistema inmunológico, sus funciones y transtornos, mediante pruebas sencillas y sofisticadas
La serología es el estudio del Sistema inmunologico utilizando el suero de la sangre (suero es el líquido transparente que se separa cuando la sangre se coagula)
Los exámenes laboratoriales inmunológicos y serológicos sirven para:
Identificación de antígenos y/o anticuerpos Investigar los transtornos del sistema inmunológico
Prueba de aglutinación en latex Es un método de laboratorio cualitativo o semicuantitativo para identificar anticuerpos o antígenos en una variedad de líquidos, fluidos y detritus corporales (suero, saliva, orina, líquido cefalorraquídeo, heces)
En el examen se utiliza partículas de látex recubiertas con un anticuerpo o un antígeno específico, si la contraparte (antígeno o anticuerpo) está presente en la muestra sospechosa, las partículas de látex se agruparán (se aglutinan)
Prueba de aglutinación en latex
+ Latex cubierto con anticuerpos
Antígenos en la muestra problema
Reacción Antígeno/Anticuerpo
+ Latex cubierto con antígenos
Anticuerpos en la muestra problema
Reacción Antígeno/Anticuerpo
Prueba de aglutinación en latex
También se puede hacer una reacción de aglutinación en tubo
No reactivo (NEGATIVO)
Reactivo (POSITIVO)
Prueba de aglutinación en latex más comunes
Factor reumatoideo, corresponde a un conjunto de anticuerpos fáciles de detectar (Ac19S, IgM, IgG e IgA) contra el fragmento Fc de la IgG
El método habitual detecta el factor reumatoideo IgM hasta en el 80% de los casos de artritis reumatoide; es positivo con títulos iguales o superiores a 1/160
El FR también puede encontrarse en algunos casos de LES, esclerodermia, dermatomiositis, rubéola, lepra, malaria, y en algunos casos, en individuos normales
Proteína “C” reactiva, es un tipo especial de proteína producida por el hígado que sólo está presente durante episodios de inflamación aguda Se detecta con el uso de un antisuero (suero que contiene anticuerpos contra la PCR)
Antígenos febriles (Reacción de Widal), para el diagnostico de enfermedades infecciosas como fiebre tifoidea, paratifoidea y brucelosis
A partir de la segunda semana en cualquiera de las enfermedades mencionadas aparecen anticuerpos en la sangre que pueden ser identificados utilizando antígenos específicos
Se utiliza antigenos:
los
siguientes
Tífico “O” (somatico) Tífico “H” (flagelar) Paratífico “A” Paratífico “B”
Brucella Abortus
Titulos por encima de 1/80 o 1/120 para cualquier antígeno, aunados a la sintomatología y a un hemograma característico avalan el diagnóstico
Antí-Estreptolisina “O”, es un antígeno cuyo título alto indica una infección reciente producida por el Estreptococo hemolítico del grupo A (amigdalitis, escarlatina, erisipela, sepsis puerperal)
Tiene especial interes para el diagnóstico de las llamadas segundas enfermedades como la fiebre reumatica y la glomerulonefritis postestreptococica
VDRL (Venereal Disease Research Laboratory), RPR (Prueba rapida de Reagina), para el diagnóstico de la Sífilis
El VRDL es como cualquier reacción de latex, mientras que en el RPR se utiliza particulas de carbón activado para poder visulizar mejor la aglutinación
V. D. R. L.
No reactivo (NEGATIVO)
Reactivo (POSITIVO)
R. P. R.
No reactivo (NEGATIVO)
Reactivo (POSITIVO)
Inmunocromatografía Es una de las técnicas de inmunodiagnóstico más modernas cuyas principales ventajas son la sencillez y rapidez del test, debido a que no es necesaria una instrumentación adicional para su realización
Fundamento del método: La muestra se pone en o con la zona del conjugado, esta lleva impregnada un dos anticuerpos específicos contra dos epítopos del antígeno a detectar y un reactivo de detección
Inmunocromatografía positiva
Inmunocromatografía negativa
Inmunocromatografía en tira Etapa Inmunológica
Etapa de revelado
NEGATIVO
POSITIVO
Inmunocromatografía en tira
Inmunocromatografía en casette
Se utiliza para el diagnóstico de embarazo, diagnóstico cualitativo de marcadores tumorales, hormonas, enzimas cardíacas etc.
Prueba de ELISA Prueba de Enzimo-InmunoEnsayo, para la detección de antígenos o anticuerpos
Se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática
Al estar el antígeno o anticuerpo marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmunoadsorbente), la reacción Ag-Ac quedará inmovilizada y con la adición de un substrato especifico que actua sobre la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro
Prueba de ELISA Pocillos o soportes inmunoadsorbentes
Prueba de ELISA
Ac en el fondo del pocillo
Ag de la muestra problema se une al Ac en el fondo del pocillo
Prueba de ELISA
Se agrega el conjugado (Ac-Enzima )
Se agrega la sustancia reactante para producir color
Prueba de ELISA
Se agrega una sustancia STOP para que pare la reacción
Prueba de ELISA Lector de la reacción en los pocillos
Tipos de ELISA
Con anticuerpos marcados ELISA Directo ELISA Indirecto ELISA Tipo sandwich Con antígenos marcados ELISA Competitivo
Las pruebas de ELISA han tomado relive con el diagnóstico del SIDA (virus del VIH), pero se puede utilizar para el diagnóstico de cualquier otra enfermedad infecciosa y para el dosaje de metabolitos, hormonas, marcadores tumorales, entre otros
ELISA para HIV Los Ac contra las proteínas del HIV pueden encontrarse en el suero generalmente dentro de las 6 a 12 semanas tras contraer la infección. Para realizar este examen se necesita de un consentimiento informado por parte del paciente
El examen de ELISA para HIV es una prueba de despistaje, un resultado positivo necesita una reconfirmación con pruebas definitivas (Western Blot, PCR)
Existe una “zona gris” o indeterminada, que amerita estudios confirmatorios en pacientes con coductas de riesgo y en mujeres embarazadas
Resultados de ELISA para HIV NEGATIVO: < 0.90 Uds ZONA GRIS (INDETERMINADO) 0.90 – 0.99 Uds POSITIVO: = ó > 1.00 Uds
Dosaje de Inmunoglobulinas El dosaje de Igs se puede realizar mediante el Enzimo-inmunoensayo (ELISA) o por el método de la quimioluminiscencia que para este caso se denomina inmunoquimioluminiscencia
Inmunoquimioluminiscencia
Inmunoglobulina A La IgA actúa protegiendo la piel y las mucosas frente a microorganismos Concentraciones elevadas de IgA se encuentra en hepatopatías crónicas, infecciones crónicas, enfermedades autoinmunes (artritis reumatoide, lupus eritematoso) y en la sarcoidosis
La IgA aumenta en los mielomas específicos de la IgA La síntesis de IgA disminuye en enfermedades de inmunodeficiencia congénita y adquirida, en gastroenteropatías y en grandes quemados
Valores referenciales IgA 0 a 1 año: 0 – 83 mg/dl 1 a 10 años: 20 – 204 mg/dl 11 a 19 años: 53 – 348 mg/dl
Adultos: 70 – 400 mg/dl
Inmunoglobulina E La IgE está firmemente ligada a los mastocitos y solo se halla libre en el suero en pequeñas cantidades Cuando un antígeno (alérgeno) a con la IgE el mastocito se estimula y libera histamina y otras aminas vasoactivas
Las aminas vasoactivas son responsables del aumento de la permeabilidad vascular, contracción del músculo liso y en reacciones alérgicas como fiebre del heno, asma, urticaria y eczema
Valores referenciales IgE 0 a 1 año: 0.00 – 14.90 UI/ml 1 a 10 años: 0.00 – 89.90 UI/ml 11 a 15 años: 0.00 – 199.00 UI/ml
16 a más años: 0.00 – 99.90 UI/ml
Inmunoglobulina G La IgG es importante por su actividad antiviral y antimicrobiana Niveles elevados de IgG se observan en hepatopatías crónicas (hepatitis, cirrosis), enfermedades infecciosas, lupus eritematoso y fibrosis quistica
La IgG aumenta en el mieloma específico de IgG La síntesis de IgG disminuye en enfermedades de inmunodeficiencia congénita y adquirida, en enteropatías, síndrome nefrítico y en grandes quemados
Valores referenciales IgG 0 a 1 año: 232.00 – 1411.00 mg/dl 1 a 10 años: 453.00 – 1560.00 mg/dl 11 a 15 años: 759.00 – 1584.00 mg/dl
16 a más años: 700.00 – 1600.00 mg/dl
Inmunoglobulina M Se utiliza para evaluar la inmunidad humoral, diagnóstico y monitorización de la terapia en casos de magroglobulinemia de Waldestrom o mieloma de células plasmáticas
Valores referenciales IgM 0 a 1 año: 0.00 – 145.00 mg/dl 1 a 10 años: 19.00 – 179.00 mg/dl 11 a 15 años: 35.00 – 188.00 mg/dl 16 a más años: 23.00 – 230.00 mg/dl
La inmunología laboratorial es el estudio del sistema inmunológico, sus funciones y transtornos, mediante pruebas sencillas y sofisticadas
La serología es el estudio del Sistema inmunologico utilizando el suero de la sangre (suero es el líquido transparente que se separa cuando la sangre se coagula)
Los exámenes laboratoriales inmunológicos y serológicos sirven para:
Identificación de antígenos y/o anticuerpos Investigar los transtornos del sistema inmunológico
Prueba de aglutinación en latex Es un método de laboratorio cualitativo o semicuantitativo para identificar anticuerpos o antígenos en una variedad de líquidos, fluidos y detritus corporales (suero, saliva, orina, líquido cefalorraquídeo, heces)
En el examen se utiliza partículas de látex recubiertas con un anticuerpo o un antígeno específico, si la contraparte (antígeno o anticuerpo) está presente en la muestra sospechosa, las partículas de látex se agruparán (se aglutinan)
Prueba de aglutinación en latex
+ Latex cubierto con anticuerpos
Antígenos en la muestra problema
Reacción Antígeno/Anticuerpo
+ Latex cubierto con antígenos
Anticuerpos en la muestra problema
Reacción Antígeno/Anticuerpo
Prueba de aglutinación en latex
También se puede hacer una reacción de aglutinación en tubo
No reactivo (NEGATIVO)
Reactivo (POSITIVO)
Prueba de aglutinación en latex más comunes
Factor reumatoideo, corresponde a un conjunto de anticuerpos fáciles de detectar (Ac19S, IgM, IgG e IgA) contra el fragmento Fc de la IgG
El método habitual detecta el factor reumatoideo IgM hasta en el 80% de los casos de artritis reumatoide; es positivo con títulos iguales o superiores a 1/160
El FR también puede encontrarse en algunos casos de LES, esclerodermia, dermatomiositis, rubéola, lepra, malaria, y en algunos casos, en individuos normales
Proteína “C” reactiva, es un tipo especial de proteína producida por el hígado que sólo está presente durante episodios de inflamación aguda Se detecta con el uso de un antisuero (suero que contiene anticuerpos contra la PCR)
Antígenos febriles (Reacción de Widal), para el diagnostico de enfermedades infecciosas como fiebre tifoidea, paratifoidea y brucelosis
A partir de la segunda semana en cualquiera de las enfermedades mencionadas aparecen anticuerpos en la sangre que pueden ser identificados utilizando antígenos específicos
Se utiliza antigenos:
los
siguientes
Tífico “O” (somatico) Tífico “H” (flagelar) Paratífico “A” Paratífico “B”
Brucella Abortus
Titulos por encima de 1/80 o 1/120 para cualquier antígeno, aunados a la sintomatología y a un hemograma característico avalan el diagnóstico
Antí-Estreptolisina “O”, es un antígeno cuyo título alto indica una infección reciente producida por el Estreptococo hemolítico del grupo A (amigdalitis, escarlatina, erisipela, sepsis puerperal)
Tiene especial interes para el diagnóstico de las llamadas segundas enfermedades como la fiebre reumatica y la glomerulonefritis postestreptococica
VDRL (Venereal Disease Research Laboratory), RPR (Prueba rapida de Reagina), para el diagnóstico de la Sífilis
El VRDL es como cualquier reacción de latex, mientras que en el RPR se utiliza particulas de carbón activado para poder visulizar mejor la aglutinación
V. D. R. L.
No reactivo (NEGATIVO)
Reactivo (POSITIVO)
R. P. R.
No reactivo (NEGATIVO)
Reactivo (POSITIVO)
Inmunocromatografía Es una de las técnicas de inmunodiagnóstico más modernas cuyas principales ventajas son la sencillez y rapidez del test, debido a que no es necesaria una instrumentación adicional para su realización
Fundamento del método: La muestra se pone en o con la zona del conjugado, esta lleva impregnada un dos anticuerpos específicos contra dos epítopos del antígeno a detectar y un reactivo de detección
Inmunocromatografía positiva
Inmunocromatografía negativa
Inmunocromatografía en tira Etapa Inmunológica
Etapa de revelado
NEGATIVO
POSITIVO
Inmunocromatografía en tira
Inmunocromatografía en casette
Se utiliza para el diagnóstico de embarazo, diagnóstico cualitativo de marcadores tumorales, hormonas, enzimas cardíacas etc.
Prueba de ELISA Prueba de Enzimo-InmunoEnsayo, para la detección de antígenos o anticuerpos
Se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática
Al estar el antígeno o anticuerpo marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmunoadsorbente), la reacción Ag-Ac quedará inmovilizada y con la adición de un substrato especifico que actua sobre la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro
Prueba de ELISA Pocillos o soportes inmunoadsorbentes
Prueba de ELISA
Ac en el fondo del pocillo
Ag de la muestra problema se une al Ac en el fondo del pocillo
Prueba de ELISA
Se agrega el conjugado (Ac-Enzima )
Se agrega la sustancia reactante para producir color
Prueba de ELISA
Se agrega una sustancia STOP para que pare la reacción
Prueba de ELISA Lector de la reacción en los pocillos
Tipos de ELISA
Con anticuerpos marcados ELISA Directo ELISA Indirecto ELISA Tipo sandwich Con antígenos marcados ELISA Competitivo
Las pruebas de ELISA han tomado relive con el diagnóstico del SIDA (virus del VIH), pero se puede utilizar para el diagnóstico de cualquier otra enfermedad infecciosa y para el dosaje de metabolitos, hormonas, marcadores tumorales, entre otros
ELISA para HIV Los Ac contra las proteínas del HIV pueden encontrarse en el suero generalmente dentro de las 6 a 12 semanas tras contraer la infección. Para realizar este examen se necesita de un consentimiento informado por parte del paciente
El examen de ELISA para HIV es una prueba de despistaje, un resultado positivo necesita una reconfirmación con pruebas definitivas (Western Blot, PCR)
Existe una “zona gris” o indeterminada, que amerita estudios confirmatorios en pacientes con coductas de riesgo y en mujeres embarazadas
Resultados de ELISA para HIV NEGATIVO: < 0.90 Uds ZONA GRIS (INDETERMINADO) 0.90 – 0.99 Uds POSITIVO: = ó > 1.00 Uds
Dosaje de Inmunoglobulinas El dosaje de Igs se puede realizar mediante el Enzimo-inmunoensayo (ELISA) o por el método de la quimioluminiscencia que para este caso se denomina inmunoquimioluminiscencia
Inmunoquimioluminiscencia
Inmunoglobulina A La IgA actúa protegiendo la piel y las mucosas frente a microorganismos Concentraciones elevadas de IgA se encuentra en hepatopatías crónicas, infecciones crónicas, enfermedades autoinmunes (artritis reumatoide, lupus eritematoso) y en la sarcoidosis
La IgA aumenta en los mielomas específicos de la IgA La síntesis de IgA disminuye en enfermedades de inmunodeficiencia congénita y adquirida, en gastroenteropatías y en grandes quemados
Valores referenciales IgA 0 a 1 año: 0 – 83 mg/dl 1 a 10 años: 20 – 204 mg/dl 11 a 19 años: 53 – 348 mg/dl
Adultos: 70 – 400 mg/dl
Inmunoglobulina E La IgE está firmemente ligada a los mastocitos y solo se halla libre en el suero en pequeñas cantidades Cuando un antígeno (alérgeno) a con la IgE el mastocito se estimula y libera histamina y otras aminas vasoactivas
Las aminas vasoactivas son responsables del aumento de la permeabilidad vascular, contracción del músculo liso y en reacciones alérgicas como fiebre del heno, asma, urticaria y eczema
Valores referenciales IgE 0 a 1 año: 0.00 – 14.90 UI/ml 1 a 10 años: 0.00 – 89.90 UI/ml 11 a 15 años: 0.00 – 199.00 UI/ml
16 a más años: 0.00 – 99.90 UI/ml
Inmunoglobulina G La IgG es importante por su actividad antiviral y antimicrobiana Niveles elevados de IgG se observan en hepatopatías crónicas (hepatitis, cirrosis), enfermedades infecciosas, lupus eritematoso y fibrosis quistica
La IgG aumenta en el mieloma específico de IgG La síntesis de IgG disminuye en enfermedades de inmunodeficiencia congénita y adquirida, en enteropatías, síndrome nefrítico y en grandes quemados
Valores referenciales IgG 0 a 1 año: 232.00 – 1411.00 mg/dl 1 a 10 años: 453.00 – 1560.00 mg/dl 11 a 15 años: 759.00 – 1584.00 mg/dl
16 a más años: 700.00 – 1600.00 mg/dl
Inmunoglobulina M Se utiliza para evaluar la inmunidad humoral, diagnóstico y monitorización de la terapia en casos de magroglobulinemia de Waldestrom o mieloma de células plasmáticas
Valores referenciales IgM 0 a 1 año: 0.00 – 145.00 mg/dl 1 a 10 años: 19.00 – 179.00 mg/dl 11 a 15 años: 35.00 – 188.00 mg/dl 16 a más años: 23.00 – 230.00 mg/dl
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