In Situ h296z

LAPORAN PRAKTIKUM BIOFARMASETIKA “ABSORBSI OBAT SECARA IN SITU”

NAMA KELOMPOK D/4:

1. Yuliana Trisnani

20144142A

2. Jolifan R Freitas

20144147A

3. Mariana Ulfah

20144153A

FAKULTAS FARMASI PROGRAM STUDI S 1 FARMASI UNIVERSITAS SETIA BUDI SURAKARTA 2016

1

I.

JUDUL ABSORBSI OBAT SECARA IN SITU

II.

TUJUAN PERCOBAAN Mempelajari pengaruh PH terhadap absorbsi obat, yang diabsorbsi melalui difusi pasif dan percobaan dilakukan secara in situ

III.

DASAR TEORI Percobaan absorbsi obat secara in situ melalui usus halus didasarkan atas penentuan kecepatan hilangnya obat dari lumen usus halus setelah larutan obat dengan kadar tertentu dilewatkan melalui lumen usus halus secara perfusi dengan kecepatan tertentu. Cara ini dikenal pula dengan nama teknik perfusi, karena usus dilubangi untuk masuknya ujung kanul, satu kanul di bagian ujung atas usus untuk masuknya sampel cairan percobaan dan satu lagi bagian bawah untuk keluarnya cairan tersebut. Cara ini didasarkan atas asumsi bahwa obat yang dicobakan stabil, tidak mengalami metbolisme dalam lumen usus, sehingga hilangnya obat dari lumen usus akan muncul dalam darah atau plasma darah, atau dengan perkataan lain hilangnya obat dari lumen usus tersebut adalah karena proses absorbsi. Bagi obat-obat yang berupa asam lemah atau basa lemah, pengaruh PH terhadap kecepatan absorbsi sangat besar, karena PH akan menentukan besarnya fraksi obat dalam bentuk tak terionkan. Bentuk ini yang dapat terabsorbsi secara baik melalui mekanisme difusi pasif. Metode ini dapat digunakan untuk mempelajari berbagai factor yang dapat berpengaruh pada permeabilitas dinding usus dari berebagai macam obat. Pengembangan lebih lanjut dapat digunakan untuk merancang obat dalam upaya mengoptimalkan kecepatan absorbsinya melalui pembentukan prodrug, khususnya untuk obat-obat yang sangat sulit atau praktis tidak dapat terabsorbsi. Melalui metode ini akan dapat diungkapkan pula besarnya permeabilitas membran usus terhadap obat melalui lipoid pathway, pori, dan aqueous boundary layer. Metode Trough and Trough merupakan salah satu cara pengobatan in situ. Cara ini dilakukan dengan menentukan fraksi obat yang terabsorbsi, setelah larutan obat dialirkan melalui lumen intestine yang panjangnya tertentu dan kecepatan 2

alirnya tertentu pula. Dalam keadaan tunak proses absorbsi dapat dinyatakan dengan persamaan : Q

C(1)

Papp = 2. r . l ln C (0) Dimana, Papp = Tetapan Permeabilitas semu C(0) = Kadar larutan obat mula-mula C(1) = Kadar larutan obat setelah dialirkan melalui intestine sepanjang 1 cm. r = jari jari usus l = Panjang usus dalam cm Q= Kecepatan alir larutan obat dalam mL menit -1 IV.

ALAT dan BAHAN Alat yang digunakan : 1. Kanula satu set 2. Cutter listrik 3. Timer/jam 4. Gelas piala besar (tempat untuk anastesi) 5. Spektrofotometer 6. Alat & perlengkapan operasi (meja operasi, gunting, pinsett, benang, penggaris) 7. Pompa peristaltik 8. Alat-alat gelas 9. Timbangan hewan percobaan Bahan – bahan Percobaan : 1. 2. 3. 4. 5.

V.

Larutan dapar fosfat berbagai PH Larutan obat dalam dapar fosfat pada berbagai PH Tikus putih jantan dengan berat 150-170 gram Larutan uretan 40% Larutan natrium klorida 0,9%b/v

CARA KERJA a. Persiapan Hewan Uji  Hewan percobaan berupa tikus jantan dengan berat antara 150-170 

gram, dipuasakan sehari (24 jam). Kemudian tikus dianasteri dengan larutan 40% secara injeksi sub kutan dengan dosis 1 ml/200 g BB tikus 3



Setelah teranastesi (perlu waktu 45-50 menit), tikus dibuka rongga

perutnya menurut arah linea mediana dengan cutter listrik. b. Persiapan Praktikum  membuat larutan dapar asetat pH 4,5 0,05 M sebanyak 1000 ml. Menimbang 2,99 g Na acetat, menambah 1,66 ml asam asetat glacial (dalam labu takar 1000 ml), dan menambahkan aquadest ad tanda 

batas. Membuat kurva baku Asetosal 1. menimbang dengan seksama 140 mg asetosal 2. melarutkan asetosal dengan alkohol 95% beberapa tetes dalam labu takar 50 ml, menambahkan dapar acetat ad tanda batas (larutan stock). 3. Dengan pipet volume mengambil 1 ml : 1,5 ml : 2 ml : 2,5 ml : 3 ml : 3,5 ml larutan stock diatas masing-masing dimasukkan dalam labu takar 50 ml dan ditambahkan larutan dapar ad tanda batas 4. Membaca absorbansi masing-masing larutan pada λ 265 nm dengan blangko dapar acetat 5. Membuat persamaan kurva baku acetosal antara konsentrasi (x) Vs

Absorbansi (y) c. Persiapan uji absorbsi In Situ - Setelah rongga perut tikus dibuka, dicari bagian lambung dan diukur kearah kanal kira-kira 15 cm dari lambung dengan pertolongan benang. Pemasangan kanul sedemikian rupa sehingga ujungnya mengarah -

kebagian anal. Dari ujung kanul ini usus diukur lagi dengan pertolongan benang kearah anal sepanjang 20 cm dan disitu dibuat lubang kedua, selanjutnya dipasang pula kanul kedua dengan ujung kanul mengarah ke bagian oral dari usus

-

dengan benang. Sebelum memberikan obat saluran intestine dibersihkan terlebih dulu menggunakan larutan dapar fosfat hungga bersih, hal ini dilakukan agar

-

tidak ada kotoran yang tersisa. Lubang pertama pada usus digunakan untuk memasukkan bahan obat yang diberikan melalui spuit sedangkan lubang bawah digunakan untuk keluarnya obat yang telah melalui saluran intestindan ditampung menggunakan

beaker

glass

yang

digunakan

untuk

membaca

absorbansinya. Waktu yang digunakan obat untuk keluar dari saluran intestin dicatat. Kadar obat dalam larutan ditentukan menggunakan

4

spektrofotometris, sehingga diperoleh data kadar sebelum dan sesudah dialirkan melalui intestine. d. Data lain yang harus dicatat adalah panjang usus dan diameter usus.hal ini dapat dilakukan dengan memotong usus antara kedua ujung kanul, satu sisi ujungnya ditali dengan menggunakan benang setelah diisi cairan baru kemudian panajang dan diameter usus dapat ditentukan. VI. HASIL 1. Data Percobaan a. Nama bahan obat : Acetosal b. Medium : Asetat c. Data kurva baku :

No 1 2 3 4 5 6

Absorbansi 0,226 0,318 0,359 0,448 0,536 0,653

Konsentrasi (mg%) 5,6 8,4 11,2 14 16,8 19,6

d. Identitas penelitian: No

Berat

Panjang

Diameter

Lama Alir

Kecepata

Hewa

Tikus(g)

Usus (cm)

Usus(cm)

Lart Obat(s)

n Alir

n 1 2 3

20 20 20

20 20 20

1,2 1,2 1,2

203 197 180

10,15 9,85 9

e. Data penentuan kadar obat secara spektrofotometris Percobaan dilakukan pada λ maks = 265 nm No

Larutan Awal

Larutan Akhir

Hewan

1 2 3

Factor Pengenceran

Absorbans

Konsentras

Absorbans

Konsentras

i 0,77 0,77 0,77

i 24,72 24,72 24,72

i 0,672 0,628 0,441

i 21,34 19,83 13,38

50x 50x 50x

5

2.

Analisis Data Papp 1: Papp =

Q 2. r . l

ln

=

10,15 2.0,6 .20

=

10,15 24

C1 C2

ln

24,72 21,34

ln 1,158

= 0,4229 . 0,1466 = 0,0619 Papp 2: Papp =

Q 2. r . l

ln

=

9,85 2.0,6 .20

=

9,85 24

C1 C2

ln

24,72 19,83

ln 1,2465

= 0,410 . 0,220 = 0,0902 Papp 3: Papp =

Q 2. r . l

ln

=

9 2.0,6 .20

=

9 24

C1 C2

ln

24,72 13,38

ln 1,8475

= 0,375 . 0,613 = 0,229 VII.

PEMBAHASAN Pada dasarnya uji in situ merupakan uji yang dilakukan dalam target tertentu yang masih berada dalam sistem organisme hidup,namun pada praktikum hewan uji tikus dianestesi dengan menggunakan eter, tikus dimasukkan kedalam sebuah boks dengan tujuan agar tikus terbius. Hal ini dapat mempengaruhi data yang diperoleh antara hewan uji yang hidup dan mati, karena hewan uji hidup bisa dipengaruhi misal gerakan peristaltik saluran cerna, supply oksigen dan lain-lain. Setelah tikus teranestesi, pembedahan tikus dilakukan dengan tujuan untuk melakukan pengujian dengan tujuan mempengaruhi pengaruh pH terhadap absorbsi 6

obat yang diabsorbsi melalui difusi pasif pecobaan dilakukan secara in situ. Selain pH pengaruh absorbs obat pada usus juga dapat dipengaruhi karena luas permukaan usus yang digunakan untuk berdifusi cukup tinggi, jadi apabila banyak obat yang diabsorbsi obat tersebut tidak terion didalam pH usus. Usus yang masih didalam tubuh tikus ditandai dengan mengikat bagian atas dan bawah yang panjangnya 20 cm. bagian atas dan bawah dilubangi dengan tujuan untuk memasukkan dan mengeluarakan obat uji. Sebelum memasukkan obat uji didalam usus tikus, usus tikus dibersihkan terlebih dahulu dengan menggunakan dapar fosfat. Hal ini dilakukan agar sisa makanan yang belum terabsorbsi tidak memepengaruhi absorbsi obat uji. Obat yang keluar melalui lubang kedua / lubang dibawah ditampung menggunakan beaker glass untuk dilakukan absobansi. Kecepatan alir yang didapatkan berdasarkan praktikum yang dilakukan sebanyak tiga kali adalah 10,15 detik, 9,85 detik, 9 detik hal ini menunjukkan bahwa kecepatan alir pada usus tikus sangat terpengaruh oleh lama alir dari larutan obat dimana semakin kecil lama alir dari larutan obat maka akan semakin kecil pula kecepatan alir dari obat sehingga obat lebih cepat di absorsi di usus. Penentuan kadar obat secara spektrofotometris, percobaan dilakukan pada λ maks = 265 nm range 0,2-0,8 yaitu 0,77 setiap kali penentuan kadar sebanyak tiga kali dengan konsentrasi kadar 24,72 sehingga perlu dilakukan pengenceran 50 ml, namun setelah dilakukan pengenceran hasil absorbansi nilai dibawah range 0,2-0,8 hal ini disebabkan karena pada saat pembesihan atau pembilasan usus kurang bersih sehingga kotoran yang masih tertinggal dapat mempengaruhi hasil absorbansi. Faktor-faktor yang mempengaruhi absorbansi meliputi jenis pelarut, pH, suhu, konsentrasi elektrolit dan adanya zat pengganggu. Kebersihan juga akan mempengaruhi absorbansi termasuk bekas jari pada dinding tabung harus dibersihkan dengan kertas tisu dan sebaiknya hanya memegang bagian ujung atas tabung setelah pembacaan atau pengukuran. Nilai Papp menunjukkan tingkat permeable membran, semakin tinggi nilai Papp maka waktu obat didalam membran untuk diabsorbsi semakin lama, sebaliknya jika nilai Papp kecil maka obat akan cepat keluar dan hanya sedikit yang diabsorbsi sehingga efek yang diinginkan tidak tercapai. Pada perhitungan Papp didapatkan nilai 0,0619 mg/cm2.detik, 0,0902 mg/cm2.detik dan 0,229 7

mg/cm2.detik. Nilai Papp yang berbeda pada tiap percobaan ini dipengaruhi oleh nilai kecepatan alir (Q) dan lama alir. Lama alir tiap percobaan menunjukkan hasil yang terlalu jauh satu sama lain, ini bias terjadi karena adanya kesalahan dalam praktikum misalnya dalam penggunaan spuit, perhitungan waktu dan lain-lain.

VIII. KESIMPULAN Berdasarkan percobaan yang dilakukan sebanayak tiga kali didapatkan nilai Papp berturut-turut adalah 0,0619 mg/cm2 detik; 0,0902 mg/cm2 detik; dan 0,229 mg/cm2 detik. Papp yang

paling baik dari percobaan diatas adalah

0,229

mg/cm2.detik sehingga dapat disimpulkan bahwa Ph berpengaruh pada absorbsi, pada pH usus obat banyak bentuk tak terion sehingga absorbsi obat didalam usus tikus cukup baik.

IX.

DAFTAR PUSTAKA - Anonim.1997.Farmakope Indonesia (Edisi III).Jakarta : Dapertemen Kesehatan -

RI. Dzakwan,

-

biofarmasetika. Surakarta: Universitas setia budi. Anonim.1995.Farmakologi dan terapan(Edisi IV).Jakarta:Universitas Indonesia.

M.,

Aisiyah,

Siti.

Dkk.2016.

Buku

petunjuk

praktikum

8