Cromatografia De Reparto 4y1b2z

Cromatografía de líquidos de alta resolución „

Cromatografía de reparto „ „ „

Tipos

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– Cromatografía de reparto • En fase inversa • En fase normal

– Cromatografía de adsorción o líquidosólido – Cromatografía iónica – Cromatografía de exclusión por tamaños o en geles

Método mas popular. Analitos de peso molecular bajo (PM<3000) Polares o no-polares Columnas con fase estacionaria unida (liquido unido químicamente a un soporte de sólido de partículas) – 3,4 o 10µm de partículas de sílice hidrolizadas recubiertas con siloxano R1 Si

O n

R2

Fase inversa

Cromatografía de reparto „

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Fase inversa (FI) – Fase móvil polar/ Fase estacionaria no polar

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Fase normal (FN) – Fase móvil no polar/ Fase estacionaria polar

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Mas ampliamente utilizada Solvente de alta polaridad-solutos de alta polaridad eluyen en primero. R= mas común- C8 (n-octil) o C18 (n-octildecil) Los grupos están en posición perpendicular a la superficie generando una estructura de cepillo o brocha. Cuanto mayor es el numero de átomos de carbono en R mayor es la eficacia. Elución a pH>7.5 puede ocurrir hidrólisis del siloxano

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Fase Normal „ „ „

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Establecimiento del método en Cromatografía de reparto. „

Mas complejo que en CG – En CG la FM solo transportaba al soluto – En HPLC la FM interacciona con el soluto

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Selección de columna - basado en las fuerzas intermoleculares de los 3 componentes ( soluto, FE, FM). La polaridad de la FE debe ser semejante a la de los analitos y FM polaridad distinta.

FM de baja polaridad/ FE polar Solutos poco polares eluyen primero Incrementar la polaridad de la FM tienen el efecto de reducir el tiempo de elucion. R-Polar- ciano, diol, amino, dimetilamino. FM-baja polaridad- etil eter, cloroformo, hexano

Establecimiento del método en Cromatografía de reparto. „ „

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Selección de la fase movil Solventes polares interaccionan mas con analito polares- eluyen mas rapido pero con menor resolucion Cuantitativamente se describe la polaridad con el indice de polaridad P’ – Varia de 2 ( no-polar) a 10.2 ( altamente polar) – En una mezcla • P’AB= ФAP’A+ ФB P’ B • En HPLC el factor de capacidad k’puede ser manipulado cambiando la composicion del solvente • Mejor relacion resolucion/tiempo cuando k’=2-5

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Cromatografía de absorción „ „ „

Cromatografía liquido-sólido FE= sílice o alumina Selección de la FM

Cromatografía de adsorción

– Para optimiza k’yα se varia la composicion de la FM-se utiliza la fuerza del eluyente Єo. – Se eligen dos solventes compatibles uno con Єopequena y otro con Єogrande. Se varian hasta obtener una k’ adecuada. „

Aplicaciones – Compuestos no polares con masas <5000 – Muestras solubles en disolventes no polares – Capaz de diferenciar entre compuestos isomeros

Cromatografía iónica „ „ „

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Separación de iones FE= resinas de intercambio iónico FM= disoluciones acuosas con algún disolvente orgánico o disoluciones reguladoras. Detector de conductividad.

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CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO RESINAS

Cromatografía iónica „

El uso de detectores de conductividad tienen el inconveniente de que requieren una elevada concentración de electrolito en la FM para eluir al analito – La conductividad de la FM enmascara a la de los analitos

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Solución: COLUMNAS SUPRESORAS inmediatamente después de la columna analítica. – Relleno de resina de intercambio iónico que convierte los iones del disolvente en especies moleculares poco ionizadas

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Cromatografía iónica

Cromatografía de exclusión por tamaños „

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Cromatografía de exclusión

Separación de compuestos de alto peso molecular- proteínas y polímeros, ácidos grasos, azucares FE= partículas poliméricas o de sílice que contienen una red de poros – Las moléculas son atrapadas en los poros y eliminadas por el flujo de FM. – moléculas > poro son excluidas- salen antes – moléculas < poro penetran y eluyen después. – moléculas~ poro se retienen, tiempo de elucion intermedio.

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