Amilasa Salival 58125t

Introducción El proceso digestivo es necesario para que el cuerpo pueda utilizar los nutrientes. Tiene lugar en el tracto buco-gastro-intestinal y es posible gracias a la actuación de enzimas hidrolíticas que actúan sobre los componentes de la dieta. La primera de ellas es la α amilasa salival, que degrada el almidón a una mezcla de hidratos de carbono más sencillos (según el nivel de actividad y el tiempo de actuación, pueden llegar a maltosa e incluso glucosa libre) y un resto, inatacable por ella, llamado dextrina límite. El contenido en α amilasa en saliva es variable, y puede ir desde 0 a 3 mg/ml, puesto que algunas personas no poseen esta actividad, sin que ello suponga ningún problema para ellos si disponen de niveles adecuados de α amilasa pancreática. La saliva es una mezcla derivada de la secreción de 3 pares de glándulas, las parótidas, submaxilar y sublingual, como también de pequeñas glándulas mucosas ubicadas difusamente sobre la mucosa de la boca. La cantidad normal secretada en una persona adulta es de 1 a 1,5 Iitros en 24 horas. La composición de la saliva es un 99,5% H2O y 0,5 % de sólidos orgánicos e inorgánicos, el pH oscila entre 6,2 y 7,4. Los principales componentes orgánicos son las glicoproteínas, proteínas (albúmina, globulinas) y carbohidratos. Los componentes inorgánicos principales son calcio, sodio, potasio, magnesio y fósforo. La enzima a-amilasa, presente en la saliva, inicia la degradación del almidón, la principal fuente de carbohidratos de la dieta humana. Esta enzima hidroliza al azar los enlaces a (14) que unen residuos de glucosa en el almidón, a excepción de los enlaces cercanos a los extremos y a los puntos de ramificación de las cadenas. La alta concentración de protones del estómago inactiva la a-amilasa

salival. La digestión del almidón continúa en el intestino delgado por la acción de la a-amilasa pancreática. No obstante, el proceso digestivo propiamente dicho tiene lugar en el intestino delgado. De la mezcla de enzimas que llegan a él, formando parte del llamado jugo pancreático, nosotros estudiaremos en esta práctica la lipasa pancreática, que consigue la hidrólisis de triacilgliceroles (TAG) a ácidos grasos (AG).

Objetivos •

Determinar la presencia o ausencia de la actividad enzimática de las enzimas de amilasa de acuerdo a las diferentes propiedades que presentan los reactantes y productos de las reacciones catalizadas.

•

Demostrar la actividad catalítica de la amilasa salival, determinando; la presencia de almidón (sustrato residual) y la presencia de carbohidratos reductores (productos de reacción).

Fundamento El método se basa en la hidrólisis del almidón (sustrato), en condiciones de pH y temperatura fisiológicos, por acción de una amilasa presente en la saliva. Los productos de reacción son polisacáridos de menor peso molecular hasta llegar a disacáridos (maltosa), no evidenciables con el reactivo de Lugol (pero sí con Fehling).

Materiales y Métodos MATERIAL BIOLÓGICO – REACTIVOS

♦ ♦ Preparado de Amilasa ♦ Almidón al 1% ♦ Cloruro de Sodio 0.0025M ♦ Buffer fosfato 0.01M ♦ Lugol ♦ Agua destilada ♦

MATERIAL DE LABORATORIO

♦ Tubos de Ensayo

♦ Gradilla

♦ Vaso de precipitación

♦ Pipetas graduadas

♦ Balones

♦

♦ Algodón

Procedimiento

PREPARACIÓN DE LA AMILASA SALIVAL

♦ Enjuagarse la boca con agua de caño, manteniendo en la boca unos 40ml de agua destilada tibia durante 2minutos. ♦ Vaciar en un vaso de precipitación. ♦ Filtrar esta solución por Lana de Vidrio. ♦ Mantenerla en hielo hasta el momento de usar.

ENSAYO DE LA ACTIVIDAD DE LA PREPARACIÓN DE AMILASA SALIVAL

REACTIVOS

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Preparado de amilasa

0.025

0.050

0.75

0.10

Almidón al 1%

1.0

1.0

1.0

1.0

NaCl 0.0025 M (ml)

0.75

0.7

0.5

0.5

Buffer fosfato 0.01M

2.225

2.25

1.75

2.4

Incubar a temperatura ambiente durante 13 minutos Detener la reacción agregando 2 gotas de solución de Lugol

Resultados

Conclusiones dddddd

REACTIVOS USADOS PARA ESTA PRÁCTICA

TUBOS MOSTRANDO LAS DIFERENTES COLORACIONES A LOS REACTIVOS POR ACCIÓN DE LA AMILASA SOBRE ELLOS

♦ En los tubos donde hay menos coloración azul indica que hay una alta actividad enzimática, pero donde el color azul es más prominente se entiende que la

actividad está reducida o

ausente. ♦ El color es un factor muy importante por ello la utilización del Lugol para lograrlas, la menor presencia de color, indica que hay mayor amilasa y por tanto mayor degradación del almidón. ♦ La mayor degradación del almidón hace que el color azul o violeta desparezca casi por completo, indicando así, la mayor actividad enzimática que existe en el medio estudiado o experimentado, por parte de la amilasa.

Referencias Bibliográficas

 BROCK,

T.

y

M.

MADIGAN.

1997.

BIOLOGÍA

DE

LOS

MICROORGANISMOS. 8va. Edición. Editorial Prentice Hall. España