12-biotechnologia W Kryminalistyce 5c2r1z

BIOTECHNOLOGIA W KRYMINALISTYCE

Wprowadzenie Największe zmiany, jakie zaszły w ostatnich latach w biologii kryminalistycznej, związane są z wprowadzeniem do badań technik genetyki molekularnej. Dzięki pracowania reakcji PCR możliwa stała się indywidualizacja tak małych śladów, jak np. pojedyncza cebulka włosowa, czy też mikrośladowe zaplamienia krwią lub wydzielinami ciała ludzkiego, wobec których klasyczne metody serologiczne były bezradne.

Metody biotechnologiczne • • • • •

Ekstrakcja DNA z biologicznych próbek Metody typowania DNA w locus DQα 5 loci PolyMarkera Locus D1S80, TH01, VWA, FGA, CD4 Fragmenty genu amelogeniny umożliwiające określenie płci

Locus DQα i pięć loci PolyMarkera • DQα (Human Leukocyte Antigen) • LDLR (Low Density Lipoprotein Receptor)

• • • •

GYPA (Glycophorin A) HBGG (Hemoglobin G Gammaglobin) D7S8 GC (Group Specific Component)

Locus D1S80 • Region VNTR • 16 par zasad powtarzających się wielokrotnie • Definiowane cyframi od 14 do 41 • Wysoki współczynnik dyskryminacji

Fragment genu amelogeniny • • • •

Gene Print™ Sex Determination System XX: 212pz XY: 212 i 218pz Wysoce konserwatywna budowa

Fragment genu amelogeniny

STR w locus TH01, VWA, FGA, CD4 • • • • • •

Shost Tandem Repeats liczące 2-7 pz Wysoki polimorfizm TH01 na chromosomie 11 VWA na chromosomie 12 FGA ma chromosomie 6 CD4 na chromosomie 12

Ekstrakcja DNA • Oddzielne pomieszczenie • Niezbędne wyposażenie • Ekstrakcja organiczna - bardzo skuteczna metoda • Procedura

Ekstrakcja DNA • Krew płynna, fragmenty zamrożonych tkanek miękkich • Plamy krwi, śliny, nasienia • Wymazy z ust • Drobiny krwi, zeskrobiny spod paznokci • Plamy będące mieszaninami • Wymazy z pochwy • Włosy

Etapy badań: • Ekstrakcja DNA • Ocena ilości wyizolowanego DNA • Typowanie DNA w układzie PolyMarkera i HLA DQα: nastawienie reakcji PCR, ocena produktów PCR na żelu agarozowym, hybrydyzacja i barwienie produktów PCR • Interpretacja wyników

Interpretacja wyników PM • Na podstawie zabarwionych na niebiesko kropek • Odczyt pasków w stanie mokrym • Intensywność zabarwienia świadczy o pozytywnej próbie • Różnica intensywności wskazuje na mieszany charakter próbki • Kontrola ujemna

Interpretacja wyników w locus DQα • Porównanie uzyskanego wzoru na pasku testowym z sondami komplementarnymi • Początek odczytu od C • Kontrola ujemna • Kontrola dodatnia • Wybarwienie na kolor niebieski

Definiowanie alleli • • • •

Na zasadzie porównania Na wynik duży wpływ ma ilość DNA Zjawisko wypadania alleli (allele dropout) Przykłady

Archiwizacja żeli

Definiowanie alleli TH01,VWA,FGA,CD4 • • • •

Sprawdzenie pochodzenia prób Typowanie na zasadzie porównania Odczyt na mokrych żelach Przykłady

Literatura: • „Badanie polimorfizmu DNA przy użyciu techniki PCR” - Wydawnictwo Centralnego Laboratorium Kryminalistycznego KGP Warszawa 2000 • http://clk.policja.pl/portal/clk/503/11021/Zespol_ Bazy_Danych_DNA.html • http://clk.policja.pl/portal/clk/503/11026/Zespol_ Badan_Biologicznych.html • http://www.biote21.com/html/pl/sek-home01.html

Pytania: