Pembahasan Enzim Lipase Gita 1h1f37

Pembahasan Enzim merupakan polimer biologik yang mengatalisis lebih dari satu proses dinamik yang memungkinkan kehidupan seperti yang kita kenal sekarang. Setiap enzim mempunyai nomor kode (EC) yang mencirikan tipe reaksi ke dalam kelas (digit pertama), subkelas (digit kedua), dan subsubkelas (digit ketiga). Digit keempat adalah untuk enzim spesifik. Lipase (EC 3.1.1.3) memiliki nama sistematik triacylglycerol hydrolase yang berfungsi menghidrolisis triasilgliserol menjadi gliserol dan asam lemak. Enzim ini bekerja secara spesifik bagi substrat yang memiliki gugus ester. Enzim lipase pada percobaan ini diekstrak dari kacang tanah.dan susu sapi segar untuk substrat digunakan Pemilihan kacang sebagai sumber lipase karena mudah ditemui dan harganya murah. Untuk memperoleh Enzim dapat dilakukan dengan cara mengisolasi dari sumbernya. Enzim yang telah diisolasi kemudian dihitung aktivitas enzim dan dapat dimanfaatkan lebih lanjut dalam bidang industri maupun kesehatan. Untuk mengeluarkan enzim dari sumbernya perlu dilakukan isolasi yang dapat dilakukan cara :

a.

Ekstraksi

Ekstraksi enzim dapat dilakukan dengan prinsip bahwa protein enzim dapat diendapkan. enzim dari kacang diekstraksi dengan penghancuran yang bertujuan memudahkan dalam pengekstraksian, karena dengan adanya proses penghalusan bahan, maka luas permukaan bahan tersebut akan menjadi semakin luas, sehingga enzim yang terdapat dalam bahan tersebut akan mudah bereaksi dengan buffer, sehingga enzim tidak akan mengalami inaktivasi. Dalam ekstraksi enzim kacang tanah digunakan buffer NaCl 0,1 N untuk mempertahankan kondisi enzim presipitat agar tidak terjadi perubahan pH dan selama penyimpanan tidak mudah terdenaturasi oleh karena perubahan pH, dimana selama proses penyimpanan, pH cenderung tidak stabil dan dapat terjadi perubahan suhu. Oleh karena itu penyimpanan dilakukan pada suhu kamar untuk mencegah proses inaktivasi enzim tersebut.

b.

Filtrasi ( penyaringan )

Filtrasi atau penyaringan adalah salah satu cara untuk memisahkan antar partikel padat dengan partikel cair. Cairan yang lolos dari medium tersebut disebut dengan filtrat dan partikel padatan yang tertahan dikenal dengan 'cake '. filtrat dipisahkan dari pecahan sel dengan penyaringan menggunkan

kertas saring pada corong dan ekstrak enzim kasar yang diperoleh digunakan untuk pengujian lebih lanjut.

Setelah dilakukan ekstraksi lipase dari kacang tanah dan didapatkan ekstrak kasar, selanjutnya dilakukan uji aktivitas. Enzim lipase mempunyai aktivitas maksimum pada daerah interface minyak dan air. Sifat yang penting dari enzim lactase diantaranya adalah daya katalisisnya dan sifat katalisisnya yang spesifik terhadap reaksi tertentu. Enzim hanya dapat bekerja pada suatu substrat tertentu atau pada sejumlah kecil senyawa yang sejenis. enzim laktase hanya bisa bekerja pada laktosa dan sangat penting untuk hidrolisis pencernaan laktosa dalam susu. Susu sapi segar sebagai substrat dipanaskan pada suhu 80 derajat Celsius bertujuan untuk menurunkan populasi mikroba dalam susu dan merupakan proses pengawetan.

Pada pasteurisasi susu, proses ini dapat menginaktifkan

fosfatase dan katalase, yaitu enzim-enzim yang membuat susu cepat rusak.

Enzim lipase diambil 2 ml sebagai enzim yang akan diamati aktivitas pembentukan digliserida dan asam lemaknya, kemudian dilakukan inkubasi selama 10 menit.

Tujuan dari proses inkubasi dalam percobaan ini yaitu faktor suhu yang mempengaruhi aktivitas enzim. Inkubasi dilakukan pada suhu 37 0C hal ini terkait karena suhu optimum enzim lipase pada suhu 37 0C dan enzim akan terhambat pada suhu tinggi. Selain itu jika inkubasi dilakukan pada suhu tinggi, maka enzim akan mengalami denaturasi, dan dengan demikian konsentrasi efektif enzim menjadi berkurang dan kecepatan reaksinya pun akan menurun. Setelah inkubasi dilakukan Penambahan alkohol yang berfungsi untuk melarutkan lemak berupa gliserol sehingga di dalam larutan hanya terdapat asam lemak. Penggunaan indikator PP berfungsi sebagai indikator yang akan merubah warna campuran pada saat campuran reaksi mencapai titik ekivalen. Pada metoda titrimetri, banyaknya asam lemak yang dilepaskan akan dititrasi oleh NaOH sehingga volume NaOH sama dengan volume asam lemak yang dihasilkan oleh aktivitas enzim lipase. Pada proses titrasi larutan diamati perubahan warna dari putih menjadi pink kemudian menjadi putih kembali. Jika larutan tidak mengalami perubahan warna kembali maka asam lemak yang dihasilkan dari enzim telah habis dititrasi. Bisa dikatakan bahwa

enzim lipase tidak melakukan aktifitas untuk memproduksi asam lemak kembali. Metoda ini akan menghasilkan nilai unit dan aktivitas pengukuran didasarkan langsung pada penentuan jumlah asam lemak yang dihasilkan dari aktifitas lipase. Hasil yang didapat dalam praktikum dibutuhkan 1,4 mL NaOH untuk membuat larutan sampel berwarna pink. NaOH blanko yang digunakan sebanyak 3,85 mL . Langkah selanjutnya, dimasukkan dalam perhitungan dan didapat hasil bahwa didalam larutan sampel terdapat 2,25 unit /mL. beberapa faktor-faktor yangmempengaruhi aktivitas enzim yaitu : cara isolasi, serta jenis substrat yang digunakanpH, suhu inkubasi, waktu inkubasi, 1) Inhibitor. Beberapa senyawa akanberkompetisi dengan substrat dalam mendapatkan bagian-bagian aktifdari enzim sehingga menghalangi terjadinya senyawa komplek ES (enzimsubstrat) sehingga menyebabkan kecepatan reaksi berkurang. 2).Temperatur. Pada umumnya kenaikan 10 0 C menyebabkan kecepatanreaksi menjadi lipat dua. Akan tetapi apabila temperatur naik terlalu tinggiterjadi denaturasi protein sehingga kecepatan reaksi turun. 3). Konsentrasiion hidrogen, pH. Kebanyakan enzim paling aktif pada pH 6-7 yaitu pHyang sama dalam sel atau darah tetapi beberapa enzim ekstraselulermempunyai pH yang optimum dalam lingkungan asam maupun basa.Faktor lainnya adalah peningkatan konsentrasi enzim akanmeningkatkan laju esterifikasi namun konsentrasi enzim yang terlalu tinggimenyebabkan pemborosan karena aktivitas enzim akan mencapaimaksimum pada konsentrasi enzim tertentu

Menurut Kreisberg and Oberman (2003), standar aktivitas lipase normal adalah 0 sampai 1,6 unit/mL serum. Hasil yang didapat dalampraktikum sebesar 0,4 unit/ mL serum walaupun sesuai dengan literaturnamun hasil praktikum ini masih terlalu jauh dari kadar seharusnya. Hal inibisa disebabkan oleh beberapa hal diantaranya jumlah NaOH yangdiperlukan untuk kontrol terlalu berlebihan, reagen yang teroksidasi olehudara, pemasukan reagen yang tidak memperhatikan urutan seharusnya,atau bisa karena pemanasan pada kontrol yang terlalu berlebihan

Untuk memproduksi enzim dalam jumlah besar dan mempunyai aktivitas yang tinggi, perlu diperhatikan faktor-faktor penting seperti kondisi pertumbuhan, cara isolasi, serta jenis substrat yang digunakan. Kondisi pertumbuhan yang menunjang produksi enzim secara maksimal adalah pH, suhu inkubasi, waktu inkubasi, dan komposisi media pertumbuhan harus mengandungsumber energi, sumber karbon, sumber nitrogen dan mineral (Wang, 1979)