Laboratorio 2. Microscopia 2 14571e

CORPORACIÓN UNIVERSITARIA ADVENTISTA PROGRAMA DE ENFERMERÍA Biología y laboratorio Práctica 2. Microscopía (segunda parte) OBJETIVOS Al finalizar este laboratorio, el estudiante podrá:

1.

Entender algunos conceptos básicos de microscopía tales como poder de resolución, poder de aumento y campo visual.

2.

Aprender a utilizar el objetivo de inmersión.

CARACTERÍSTICAS DE LA VISIÓN CON EL MICROSCOPIO

Poder de aumento. Es la capacidad que posee un instrumento óptico para producir una imagen aumentada de un objeto debido al efecto de los lentes oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el número de veces que aumenta el lente ocular por el número de veces que aumenta el lente objetivo. Si el objetivo aumenta la imagen 40 veces (40x), esta al pasar por el lente ocular será nuevamente aumentada (10x) para un aumento total de 400 veces. 40x * 10x = 400x Este resultado permite saber cuántas veces más grande estamos viendo la imagen de un objeto.

Poder de resolución. Es la posibilidad de distinguir separados dos puntos muy cercanos entre sí. Cuanto mayor sea el poder de resolución, menor será la distancia entre dos puntos a la cual pueden distinguirse como tales. La distancia límite en la cual dos puntos pueden ser todavía distinguibles se denomina Límite de Resolución. El poder de resolución de un microscopio compuesto depende de la longitud de onda de la fuente luminosa y de la apertura numérica (propiedad óptica de la lente). Puede ser calculado mediante la siguiente fórmula:

En la que λ es la longitud de onda de la fuente luminosa con la cual se observa (que va de 400 a 700 nm). En los microscopios usados en este laboratorio la longitud de onda corresponde a 640 nm y AN es la apertura numérica de la lente y es específica para cada lente objetivo. Existe una correspondencia entre el aumento de un objeto y su apertura numérica, de tal modo que las lentes con mayores aumentos generalmente tendrán mayores aperturas numéricas. El poder de resolución es quizá la característica más importante de un buen

microscopio ya que de nada sirve una imagen muy grande del objeto, si ésta se ve borrosa y no puede distinguirse en sus detalles.

Campo visual. Es el área circular que se observa al mirar por los oculares. Está área varía según las lentes utilizadas.

Los diámetros de los campos visuales de un microscopio se calculan dividiendo el valor del número

de campo por el aumento del objetivo que se esté utilizando, es decir.

Esta relación viene dada en milímetros.

Unidades utilizadas en microscopía. La mayoría de los organismos y las estructuras que se estudian en el microscopio tienen tamaños muy pequeños. Por tanto, para medirlos es necesario utilizar unidades como el angstrom (A°), el nanómetro (nm), el micrómetro (µm) y en algunos casos el milímetro (mm). Las equivalencias de estas unidades son las siguientes: 1 mm = 1000 µm 1 µm = 1000 nm 1nm =

10 A°

MATERIALES 

Papel delgado con letras impresas





Cubreobjetos



Gotero con agua



Portaobjetos



Aceite de inmersión



Un microscopio compuesto por estudiante.



Toalla klinex muy suave.

Placas

permanentes

(sangre,

de

microorganismos, etc)

PROCEDIMIENTO

1.

Poder de resolución

Para entender en forma práctica el poder de resolución, tome un papel delgado con letras impresas, haga un montaje en fresco y enfoque la letra en 4x, 10x y 40x.

¿Cómo puede relacionar los valores numéricos de los poderes de resolución obtenidos para cada objetivo y las observaciones que acabas de hacer en los objetivos 4, 10 y 40x.

Complete el siguiente cuadro.

Objetivos

Poder de resolución

4x 10x 40x 100x

4X

10 X

40 X

Observación de una letra de papel transparente en el microscopio

2.

Poder de aumento. Complete el siguiente cuadro con los aumentos del microscopio óptico compuesto utilizado en esta práctica

Poder de aumento del

Poder de aumento del

objetivo

ocular

Aumento total

4x 10x 40x 100x

3.

Campo visual.

Vuelva a enfocar de nuevo la placa de las letras impresas. ¿Con cuál de los tres

objetivos ve un área más grande en la letra? ¿Con cuál objetivo hay mayor poder de resolución?

4. Diámetro (d) del campo visual.

Con la información dada en el fundamento teórico

calcule los

diámetros de los campos visuales para los diferentes objetivos de su microscopio.

Objetivos

Diámetro (en mm)

4x 10x 40x 100x

5.

Observación con el objetivo de inmersión. Para esta observación emplee las placas permanentes que le entregue su profesor y proceda de la siguiente manera:



Enfoque en 4, 10 y 40 x.



Después de obtener la imagen en 40x, gire el revólver hacia la izquierda, ponga una gota de aceite de inmersión encima de la muestra que va a observar.



Complete el giro del revólver hasta que el objetivo de 100x (objetivo de inmersión) este en posición correcta.



Mire por los oculares y dele nitidez a la imagen por medio de la perilla micrométrica.



Esquematice lo observado.



Finalmente retire la placa y limpie el residuo del aceite del lente con un papel kleenex suave, sin frotarlo, y séquelo con otro papel kleenex.

Células sanguíneas

Micro-preparado de:

Micro-preparado de:

Observación de micro-preparados en aceite de inmersión

CUSTIONARIO 1.

Realice las siguientes conversiones: a) 0.025 mm en micrómetros y en A° -3 b) 5 x10 nm en mm y A° c) 1300 A° en nm, micrómetro y en mm

2.

Determine según los poderes de resolución máximos aproximados del ojo humano, del microscopio compuesto y del microscopio electrónico, con cuál o con cuales de estos se pueden ver las siguientes estructuras. Estructura

Promedios de medidas

Virus del polio

300 A° de diámetro

Virus de la viruela

2500 A° de diámetro

Ribosomas de las eucariotas

140 a 180 A° de diámetro

Escherichia coli

200000 A° de largo

Mitocondrias

0.2 a 0.5 µm de largo

Cloroplastos

5.8 µm de diámetro

Glóbulos rojos de mamíferos

7.5 µm de diámetro

Paramecium

0.1 a 0.3 mm de largo

Óvulo humano

0.15 mm de diámetro

BIBLIOGRAFÍA Solomon, Berg & Martin (2004). Biology, 7th Ed. Brooks Cole Publ. Uribe; Frank., Moreno, Jaime., Aldana, Daniel., y Pineda Nubiola, Manual de laboratorio de Biología general. Universidad de Antioquía. 1998