Informe Final Proyecto Mimosa (1) 1e6e5g

“FRACCIONAMIENTO FITOQUIMICO DE LOS METABOLITOS SECUNDARIOS EN HOJAS DE LA PLANTA MEDICINAL VERGONZOSA (Mimosa púdica)” Pedro Vejarano Jara1 Guerrero Vejarano Tania2 Ruiz Castre Sandro3 Universidad Nacional Agraria de la Selva Tingo María Perú 1.- Ing° Químico, Ms.C., [email protected] 2.- Ing° Químico 3.- Ing° Conservación de Suelos y Aguas

RESUMEN En el presente trabajo de investigación se realizo el fraccionamiento fitoquímico del contenido de metabolitos secundarios en hojas de la planta medicinal vergonzosa (Mimosa púdica). Esta planta es muy usada por sus acciones medicinales como: antidepresivas, antiofídicas, anti fertilidad, etc. La especie fue ubicada y recolectada en el mes de Agosto del 2008, aproximadamente a las 7 y 30 am, en el lugar denominado Vivero de la Facultad de Recursos Naturales Renovables de la Universidad Nacional Agraria de la Selva de Tingo Maria, a una altura de 660 m.s.n.m. Las hojas fueron secadas en estufa y posteriormente molidas. Con 100 g de polvo seco se realizaron dos maceraciones una acuosa y otra etanol-agua (70:30), posteriormente se realizó el fraccionamiento fitoquímico siguiendo la metodología citada por Martínez, A. (1991). El mencionado fraccionamiento se realizó para identificar cualitativamente los metabolitos secundarios siguientes: aminoácidos (AA), compuestos fenolitos (CF), taninos (TA), flavonoides (FL), triterpenoides y/o esteroides (TE), quinonas (QU), cardiotonicos (CA), alcaloides (AL) y leucoantocianinas (LE). Los resultados se expresaron con las siguientes asignaciones: negativo (-), dudoso (+/-), positivo (+), francamente positivo (++) y no determinado (ND). Considerando las mencionadas asignaciones y dependiendo del tipo de solvente utilizado el reporte de los resultados sobre el contenido de metabolitos secundarios es como sigue: En maceración acuosa, los extractos o fracción A se identificó: AA, CF, TA, FL y LE como (+); QU como (+/-). En la maceración con acido clorhidico diluido, fracción C medio acido: AL como (+/-); en la fracción D: Al como (+/-); enla fracción E medio básico CF como (+). En la maceración con alcohol al 70% los extractos dieron los siguientes resultados: en la fracción A medio etanólico, AA como (+), en medio acuoso en caliente, FL como (+), LE como (++), en medio acuoso en frio, CF como (++); en la fracción B medio clorofórmico, FL como (+), TE como (++); en la fracción D, medio etanólico, LE como (+/-), en medio clorofórmico, TE como (+); en la fracción E, medio acido, LE como (+/-). Según los resultados se destaca los extractos etanólicos en las fracciones A y B , con el contenido de: CF, TE y LE como (++).

2 Palabras claves: fraccionamiento fitoquímico, Vergonzosa, Mimosa pudica, compuestos fenólicos, taninos, triterpenos, esteroides, metabolitos secundarios, leucoantocianinas, antiofídicos, antidepresivos, antifertilidad. INTRODUCCIÓN Tradicionalmente, ciertas plantas vegetales se vienen usando como remedios para aliviar síntomas o tratar enfermedades, en ese sentido, estas plantas son consideradas fármacos (o drogas) con capacidad de operar, alternativamente, como remedios o venenos, dependiendo de las dosis, la oportunidad, la vía de istración, la idoneidad de quien las indica, la constitución del sujeto en tratamiento, entre otros factores. La industria farmacéutica se basa en los conocimientos tradicionales para la síntesis y elaboración de fármacos, y el proceso de verificación científica de estas tradiciones continúa hoy en día con mayor énfasis, descubriéndose constantemente nuevas aplicaciones. Muchos de los fármacos empleados hoy en día son una réplica sintética o los principios activos son aislados de remedios vegetales tradicionales. Tal es así, que estudios realizados con la sensitiva, vergonzosa o dormilona (Mimosa pudica) han demostrado que esta planta tiene propiedades curativas muy importantes entre otros como anti mordeduras de serpientes venenosas, contra picaduras de escorpión, antifertilidad, antidepresivas, antiinflamatorias, así mismo alivia el dolor de cabeza, migrañas, insomnio, diarrea, disentería y la fiebre. Esta planta tiene hojas compuestas, bipinnadas, formadas por dos pares de pinnas que contienen de 15-25 pares de foliolos lineares obtusos, con forma de helecho. Una característica muy notable es que al mínimo toque de sus hojas (compuestas por numerosos foliolos) las mismas se contraen sobre el tallo como si se cerraran, con un mecanismo en la base, al mismo tiempo los tallos menores se dejan vencer por el peso. Las hojas permanecen plegadas durante toda la noche. A pesar de todas estas propiedades, nos cabe hacer las siguiente preguntas: ¿Cuáles son los principios activos de esta planta que neutralizan la dosis letal de la mordedura de serpiente y/o del escorpión?, ¿Qué metabolitos secundarios se encuentran presente en la composición fotoquímica de esta planta?, ¿se está dando el uso adecuado y conservación de esta planta en la región del alto Huallaga?, ¿constituye un recurso natural que se puede explotar adecuadamente?, ¿se han realizado estudios al respecto en la Región?, etc., muchas son las interrogantes, las cuales nos corresponde resolver, por lo que, para el presente caso nos planteamos el siguiente problema: ¿Qué metabolitos secundarios se encuentran presente en la composición fitoquímica de planta denominada sensitiva, vergonzosa o dormilona (Mimosa pudica) de la Región del alto Huallaga?. Los resultados del presente trabajo serán de mucha utilidad para el uso adecuado de esta planta medicinal, conservando el recurso natural el cual contribuirá a fomentar la propagación e industrialización.

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REVISION DE LITERATURA. Mitra and Somasundaram. 2007. Reportan que la planta Mimosa púdica pertenece a la familia Mimosaceae, es una planta que crece en suelo húmedo, residuos, césped, matorrales y mala hierba. La planta es de origen centroamericano, pero se ha distribuido en todas las partes tropicales del mundo. El interés por la Mimosa púdica o planta sensible, es principalmente por la química y por la biología del movimiento rápido de las hojas al tocarlo y el movimiento lento controlado por un reloj biológico. Sin embargo, también es una planta dotada de propiedades medicinales. En muchos países, los extractos de mimosa púdica se utilizan en el tratamiento de dolor de cabeza, migrañas, insomnio, diarrea, disentería y la fiebre. El polvo de hojas y raíces se usan para tratar fistulas causadas por objetos externos. La pasta de las hojas se aplica a la hinchazón glandular de los senos. La mimosa púdica es popular por sus propiedades antiinflamatoria y se conoce como pan yaa yot en el dialecto en Tailandia. La raíz se hierve con agua o con alcohol y se utiliza como bebida. En la medicina tradicional, las hojas y tallos se utilizan contra la picadura de escorpión, mientras que los extractos de raíz se utilizan en contra de la mordedura de cobra. Vejayan, Ibrahim y Othman (2007): reportan el efecto neutralizante de Mimosa púdica al envenenamiento letal por mordedura de serpiente. En este trabajo de investigación estudiaron la neutralización de los efectos letales del veneno de la serpiente Naja naja kaouthia, por co-incubación del veneno en extractos acuosos de diversas plantas. La mezcla veneno extracto fue inyectado por vía intraperitoneal (IP) en ratones. De las 17 plantas examinadas, solo la mimosa púdica (Mimosaceae) mostro el 100% de poder neutralizante de letalidad 2LD50 de este veneno. Tambien se encontró que esta planta tenia el 50% a mas el poder de neutralizar la toxicidad 2LD50 de otros venenos, como: Ophiophagus Hannah, Bungarus candidus, B. fasciatus y Calloselasma rhodostoma. La fracción activa (MP188ECT3) mostro interacción hacia el veneno N.n. kaouthia. El estudio se realizo por electroforesis (2-DE) establecido por el uso inmovilizado del veneno en un rango de pH 3-10. Los resultados demuestran que los extractos acuosos de Mimosa púdica son agentes anti veneno de origen vegetal usado en contra de cinco venenos de serpientes venenosas que se encuentran en Malasia. Mohanta and Kumar (2000), reportan que los extractos acuosos y alcohólicos de raíces secas de Mimosa pudica mostraron actividad inhibitoria sobe: letalidad, miotoxicidad de enzimas y toxicidad del veneno de Naja kaouthia. En particular los extractos acuosos tienen mayor efecto en comparación de los extractos alcohólicos. Estos resultados sugieren que los extractos acuosos de la raíz de mimosa púdica poseen compuestos, que inhiben la actividad del veneno de cobra.

4 Ganguly, Mahanta. 2007. Muchas plantas se usan como agentes de control de la natalidad en la población rural de la India dentro de estas se encuentra la planta Mimosa púdica. Esto se comprobó istrando, extractos metanólicos secos, por vía oral a ratones albinos suizos durante 21 días consecutivos. Tanto el ciclo reproductivo, hormonas reproductivas (LH, FSH, prolactina, estradiol y progesterona) y el numero de camadas producidas, fueron estudiadas tanto en el control como en el grupo de ratones a los cuales se le istro el extracto metanólico de la raíz mediante el uso de métodos estándar. Los extractos metanólicos de la raíz fueron analizados por métodos cualitativos y cromatográficos en capa fina. Determinaron que a una dosis de 300 mg/kg de peso coporal/dia, el ciclo reproductivo se prolongo con un aumento importante en la duración de la fase diestros reduciendo el número de camadas en ratones albinos. El numero de camadas se incremento en el periodo pos tratamiento. El análisis de las principales hormonas (LH, FSH, prolactina, estradiol y progesterona) que participan en la regulación del ciclo reproductivo, mostro que el extracto de raíz altera la liberación de gomadot y la secreción del estradiol. MATERIALES Y METODOS Análisis fitoquímico preliminar de muestras vegetales Domínguez (1973) reporta dos métodos para la extracción y análisis de algunos compuestos químicos como: alcaloides, glicósidos cardiotónicos, esteroles, triterpenos, saponinas, flavonoides, taninos y fenoles; en plantas medicinales. Según Wall et al (1954), citado por Domínguez (1973) el material vegetal seco y molido se somete a una extracción con etanol al 95% en caliente, luego se filtra en frío y se completa a un volumen de 100 ml con agua después se divide en dos partes A 25 ml y B 75 ml. En la solución A se investigan las saponinas por medio de una prueba histológica según Griffing et al (1968) citado por Domínguez (1973). La solución B también se divide en dos porciones, en una de ellas se analizan los flavonoides por medio de reacciones cualitativas, la otra porción de esta solución se divide en cuatro partes, en la primera se investigan los alcaloides, en la segunda taninos, en la tercera fenoles hidrosolubles, según Wall et al (1954) y Galindo et al (1989) y en la cuarta se analizan triterpenos por métodos cualitativos. Para Cain et al (1961), citado por Domínguez (1973), el material seco y molido se somete a extracción con metanol en soxhlet, el metanol se evapora y el residuo rojo-café semisólido se usa para analizar alcaloides, flavonoides, saponinas, esteroides y triterpenos. METODOLOGIA EXPERIMENTAL El fraccionamiento fitoquímico de las hojas de la planta medicinal Mimosa pudica, se realizó siguiendo el método citado por Alejandro Martínez 1991 ( ver las figuras del 1 al 5), según estos diagramas de flujo, en el primer caso, 50 g de muestra seca y pulverizada (FRACCION A: AA, CF, TA, FL, TE, QU, CA, AL, LE) fueron macerados con agua por 24 horas, con el filtrado se hizo los ensayos de: FL, LE, CF, AA y TA. El residuo fue macerado con HCl diluido por 24 horas, el residuo constituye la FRACCION B y con el filtrado se prosiguió según las indicaciones del

5 diagrama de la figura 1, obteniéndose las FRACCIONES: C (CA, TE Y AL), D (FL, LE, CA, TE, AL), E (AL, FL, CF, TA). Para el reporte se tuvo en cuenta la simbología convencional y significado según como se indica en el cuadro siguiente: CUADRO 1: Resultado, asignación y convenciones Resultado Asignación Negativo Dudoso +/Positivo + Fran. Posi. ++ No determi. ND

Convenciones Aminoácidos AA Quinonas Comp. Feno. CF Cardiotónicos Taninos TA Alcaloides Flavonoides FL Leucoantocianinas. Triter/Esteroi. TE

QU CA AL LE

En el segundo caso, 50 g de muestra seca y pulverizada FRACCION A, fueron macerados con etanol al 70% por 24 horas, después fue sometido a reflujo por una hora y finalmente fue filtrado, siguiendo las indicaciones de los diagramas 2, 3, 4 y 5 correspondientes a las figuras 2, 3, 4 y 5 respectivamente, los resultados de los ensayos se reportan en el cuadro 2 adjunto, con la simbología convencional y asignación respectiva de acuerdo a lo que se indica en el cuadro anterior, y cuyo procedimiento es el que sigue: OBTENCION Y ANALISIS DE LA FRACCION A: Cincuenta gramos de la muestra seca y pulverizada fueron macerados con etanol 70%, por 24 horas, después se sometió a reflujo por una hora y se filtro en caliente. El residuo fue lavado con alcohol y adicionado al filtrado principal, el residuo fue desechado y el filtrado principal conjuntamente con los lavados constituyen la FRACCION A. Con un mililitro de la fracción A se hicieron los ensayos de AA y Cuarenta mililitros pasan a ser la FRACCION A RESIDUAL, el resto fueron evaporados hasta sequedad con calentamiento no mayor a 50° C, después fueron disueltos con 20 ml de agua caliente y filtrados, el residuo fue desechado y con 10 ml de el filtrado acuoso caliente se hizo los ensayos de: FL y LE; diez mililitros de la muestra anterior fueron filtrados en frió con el que se hizo los ensayos de: CF y TA, el residuo fue desechado. ANALISIS DE LAS FRACCIONES A RESIDUAL Y B: La fracción A residual se llevo a sequedad, después se disolvió con 30 ml de HCl al 5%, fueron calentados a 60° C por 15 minutos y después filtrados en caliente (FILTRADO ACUOSO ÁCIDO I), el residuo insoluble se lavo con 20 ml de HCl al 5% y después se filtro, el filtrado se adiciona al filtrado del acápite anterior (FILTRADO ACUOSO ÁCIDO I). El residuo del acápite dos se disolvió con 30 ml de cloroformo, después se deshidrató con Na2SO4 anhidro y luego se filtró. El residuo se desecho y el filtrado fue la FRACCIÓN B con la cual se ensayó: TE, CA, QU, FL. OBTENCION Y ANALISIS DE LA FRACCION C: El filtrado ACUOSO ÁCIDO I se alcalinizó con NH4OH conc. (pH 10-11), después se extrajo dos veces con 15 ml

6 de cloroformo. La fase acuosa básica se guardó para obtener las fracciones D y E. La fase clorofórmica se lavó con 10 ml de agua cuyo lavado se adiciona a la fase acuosa anterior, y la fase orgánica se deshidrató con Na 2SO4 anhidro y después se filtró. El residuo se desechó y el filtrado fue la Fracción C. Con 5 ml de la Fracción C se ensayó: CA y TE. El resto se llevó a sequedad y después se disolvió con 5 ml de HCl al 5 % se calentó y luego se filtró. Con el filtrado se ensayó AL, y el residuo se desechó. OBTENCION Y ANALISIS DE LAS FRACCIONES D Y E: La fase acuosa básica del análisis anterior se mezclo con una solución salina semisaturada de NaCl y después se extrajo dos veces con 15 ml de cloroformo. La fase acuosa fue la FRACCIÓN E. La fase orgánica se lavó con 20 ml de solución semisaturada de NaCl, la fase acuosa se adicionó a la FRACCIÓN E. La fase orgánica se deshidrató con Na2SO4 anhidro y después fue filtrada, el residuo se desechó y el filtrado fue la FRACCIÓN D, la cual se dividió en tres porciones iguales de 5 ml c/u: D1, D2 y D3, se les llevó a sequedad. La porción D1 se disolvió en 4 ml de etanol y se ensayó: FL, CA, LE. La porción D2 se disolvió en 1 ml de cloroformo y se ensayó: TE. La porción D3 se disolvió con 5 ml de HCl 1% y se ensayó: AL. La fracción E del acápite dos, se neutralizó con HCl y se ensayó: FL, LE, Al (en medio ácido), CF (pH ligeramente ácido) y TA (pH neutro). Los ensayos para la identificación cualitativa de los metabolitos secundarios presentes en las fracciones A-E de los extractos de las hojas de la planta medicinal Mimosa pudica se realizó de acuerdo a las indicaciones de Martínez (1991), que a continuación se detalla: ENSAYO DE SHINODA (O DE CIANIDINA) PARA FLAVONOIDES Y OTRAS SUSTANCIAS CON EL NUCLEO γ−BENZOPIRONA: a un ml de solución en un tubo de ensayo limpio, se le agregó unas limaduras de magnesio, después se le agregó por las paredes del tubo gotas de HCl concentrado, los resultados fueron positivos y/o negativos de acuerdo a la aparición de los colores: naranja a violeta es prueba positiva para la presencia flavonoides. ENSAYO DE ROSENHEIM (PARA LEUCOANTOCIANIDINAS): a un ml de solución acuosa en un tubo de ensayo limpio, se añadió 0.5 ml de HCl concentrado, fue mezclado y calentado durante 10 minutos a 100°C y después enfriado y fue trasvasado a otro tubo de ensayo al cual se le agregó 0.4 ml de alcohol amilico y mezclados y se dejó reposar hasta la aparición de dos fases. La prueba se consideró positiva si aparecía la coloración en la fase amílica que vaya desde el carmesí oscuro al rosado débil. ENSAYO DEL FeCl3 (PARA COMPUESTOS CON HIDROXILOS FENOLICOS): a 1.0 ml de solución acuosa o alcohólica en un tubo de ensayo limpio, se le añadió 1 gota de FeCl 3 al 1% alcohólico, se mezcló. La aparición de coloraciones: violeta, verdes, azules u oscuras se consideró prueba positiva. ENSAYO DE LA GELATINA-SAL (PARA TANINOS): a 1.0 ml de solución acuosa neutra en un tubo de ensayo limpio, se le añadió 1.0 ml de solución de gelatina-sal. La formación de un precipitado se consideró prueba positiva. ENSAYO DE LIEBERMANN-BURCHARD (PARA TRITERPENOIDES Y/O ESTEROIDES CON GRUPOS DIENO CONJUGADOS REALES O POTENCIALES): a 0.5 ml de solución clorofórmica anhidra en un tubo

7 de ensayo limpio y seco, se le añadió 0.5 ml de Anhídrido acético, después se le añadió por las paredes del tubo, una gota de ácido sulfúrico concentrado. Se consideró positiva la prueba cuando aparecían coloraciones violeta, verde o azul. ENSAYOS PARA ALCALOIDES: a 0.5 ml de solución acuosa ácida en tubo de ensayo limpio, se le añadió una 1 gota del reactivo de Mayer, se consideró prueba positiva cuando aparecen precipitados y/o turbidez en la solución. ENSAYO DE NINHIDRINA (PARA AMINOACIDOS): Se colocó 1 gota de solución, en una tirilla de papel filtro, fue secado y después se añadió 1 gota de reactivo de ninhidrina (Solución al 0.002% en alcohol), después se calentó en una plancha a 105° C. La aparición de coloraciones violeta, azul o rosada se consideró prueba positiva. El proceso experimental se desarrollo de acuerdo a los diagramas de las figuras: 1, 2, 3, 4 y 5:

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MUESTRA SECA Y PULVERIZADA (50 g)

FRACCION A (AA, CF, TA, FL, TE, QU, CA, AL, LE) H2O HCl diluido

Ensayar FL, LE, CF, AA, TA

INSOLUBLES (FRACCION B)

SOLUBLES Alcalinizar, particion con CHCl3 o CH2Cl2

FASE CHCl3 (FRACCION C)

FASE ACUOSA BASICA 1. Salado ("Salling out") 2. Particion con CHCl3

FASE ACUOSA (FRACCION E) Ensayar Al, FL, CF, TA Ensayar CA, TE

FASE CHCl3 (FRACCION D) Ensayar FL, LE, CA, TE,AL

Ensayar AL (en medio acido)

Figura 1: diagrama de flujo para la fraccion fitoquimica con agua y HCl diluido

OBTENCION Y ANALISIS DE LA FRACCION A

ANALISIS DE LAS FRACCIONES A RESIDUAL Y B

MUESTRA (50 g) SECA Y PULVERIZADA

FRACCION A RESIDUAL

1. Macerar con etanol 70%, 24 horas 2. Reflujar 1 hora 3. Filtrar caliente Residuo, lavarlo con alcohol

Residuo Desechar

Residuo insoluble

1 ml 40 ml Llevar a sequedad

FRACCION A RESIDUAL

Disolver en 20 ml de agua caliente y fria Residuo

FILTRADO ACUOSO 10 ml

Desechar

Añadir 30 ml de HCl 5% Calentar a 60°C durante 15 minutos Filtrar en caliente

FILTRADO (FRACCION A)

Filtrado

Ensayar AA

Llevar a sequedad

Ensayar FL y LE

10 ml Filtrar en frio

FILTRADO ACUOSO ACIDO I

Lavar con 20 ml de HCl 5% y filtrar Residuo

Filtrado

Disolver con 30 ml de cloroformo o diclorometano Deshidratar con Na2SO4 anhidro y filtrar

Residuo

Filtrado acuoso

Filtrado (FRACCION B)

Desechar

Ensayar CF y TA

Ensayar TE, CA, QU, FL.

Figura 2: Obtension y analisis de la fraccion A

Residuo Desechar

Figura 3: Analisis de las fracciones A residual y B

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ANALISIS DE LAS FRACCIONES D Y E

OBTENCION Y ANALISIS DE LA FRACCION C FILTRADO ACUOSO ACIDO I

FASE ACUOSA BASICA

Alcalinizar con gotas de NH4OH conc. (pH 10-11) Particion con 2x15 ml de cloroformo (o diclorometano)

FASE organica

FASE ACUOSA BASICA

Lavar con 10 ml de H2O FASE organica

Fase organica

FASE ACUOSA (FRACCION E)

Lavar con 20 ml de solucion semisaturada de NaCl

FASE ACUOSA

Fase organica FASE ACUOSA

Deshidratar con Na2SO4 anhidro y filtrar

RESIDUO

Hacer particion con 2x15 ml de CHCl3 o CH2Cl2

Deshidratar con Na2SO4 anhidro y filtrar

Neutralizar con HCl y ensayar FL, LE, AL (en medio acido), CF (pH ligeramente acido) y TA (a ph neutro)

Filtrado (FRACCION C)

DESECHAR

5 ml

Resto Llevar a sequedad

Ensayar CA y TE

FILTRADO Ensayar AL

Disolver en 10 ml de HCl 5% con calor y filtrar Residuo Desechar

Figura 4: Obtencion y analisis de la fraccion C

Residuo

FILTRADO (FRACCION D)

Desechar Repartir en tres porciones iguales de 5 ml c/u: D1, D2 y D3. llevar a sequedad.

Disolver D1 en 4 ml de etanol y ensayar FL, CA y LE Disolver D2 eb 1ml de CHCl3 y ensayar TE Disolver D3 en 5 ml de HCl 1% y ensayar AL

Figura 5: Analisis de las fracciones D y E

RESULTADOS y DISCUSIONES Los resultados se encuentra en el Cuadro 2, en el cual se utilizó los siguientes solventes: agua, ácido clorhídrico diluido y etanol al 70%, de acuerdo a la metodología citada por Martínez, A. 1991. Compuestos aminoácidos (AA) Los ensayos con ninhidrina para la identificación de aminoácidos dio resultados positivo (+) en los extractos acuosos y en los extractos hidroalcoholicos fracción A medio etanólico. Estos resultados confirmarían la presencia de aminoácidos según Moubacher y Schoenberg (1952) y Ruhemann (1911) Compuestos fenólicos (CF) Los ensayos con el cloruro férrico para la identificación de compuestos fenólicos solo en los extractos hidroalcoholicos arrojaron un color azul oscuro intenso francamente positivo (++) en la fracción A en medio acuoso frio. Asimismo un resultado positivo (+) en extracto acuoso y en extracto acido clorhídrico diluido fracción E. Estos resultados confirmarían la presencia de compuestos fenólicos según Wall et al (1954). Taninos (TA) Los ensayos con el reactivo gelatina-sal, para la identificación de taninos solo en la extracción acuosa dio resultado positivo (+), esto confirmaría la presencia de taninos según lo reporta Wall et al (1954). Flavonoides (FL) En los ensayos con ácido clorhídrico concentrado en presencia de magnesio para la identificación de flavonoides dio un resultado positivo (+) por el color violeta bien definido en los extractos: acuoso, e hidroalcoholico fracción A medio acuoso caliente y fracción B. Estos resultados confirman la presencia de flavonoides, según lo reportado por Caín et al (1961). Triterpenoides y/o esteroides (TE) En los ensayos con ácido acético catalizados con ácido sulfúrico concentrado para la identificación de triterpenos y/o esteroides dio un resultado francamente positivo (++) por el color violeta intenso, en el extracto hidroalcoholico fraccion B y un resultado positivo (+) fracción D. Esto confirmaría la presencia de tritepenoides y/o esteroides según Galindo et al (1989). Alcaloides (AL) En los ensayos con el reactivo de mayer para la identificación de alcaloides dio un resultado dudoso (+/-) por la ligera turbidez en el extracto acuoso acido en las fracciones C medio acido y fracción D, esto se confirma por el reporte de Caín et al (1961). Leucoantocianidinas (LE)

12 En los ensayos para la identificación de leucoantocianidinas dio un resultado francamente positivo (++) por el color carmesí bien definido en la fase amílica del extracto hidroalcoholico fracción A medio acuoso caliente. Asimismo dio un resultado positivo (+) por el color carmesí en el extracto acuoso y un resultado dudoso (+/-) en los extractos hidoalcoholicos fracción D medio alcholico y fracción E medio acido. Esto se confirma según el reporte de Martínez (1991). Quinonas (QU) Los ensayos para la identificación de quinonas dio un resultado dudoso (+/-) solo en el extracto acuoso, esto se confirmaría posiblemente la presencia de compuestos quinonas, según el reporte de Clar, E (1939). Ver. 72: 1645.

CUADRO 2: Resultados del fraccionamiento fitoquímico de las hojas de la planta medicinal suelda con suelda

Leyenda: Fracciones A B C D E

Resultado Asignación Negativo Dudoso +/Positivo + Fran. Posi. ++ No determi. ND

Convenciones Aminoácidos AA Quinonas Comp. Feno. CF Cardiotonicos Taninos TA Alcaloides Flavonoides FL Leucoantocia. Triter/Esteroi. TE

QU CA AL LE

CONCLUSIONES Solv. Frac. Med.

Agua A H2O

AA CF TA FL TE QU CA AL LE

+ + + + +/ND +

Agua + HCl C D E CHCl3 CHCl3 CHCl3 -OH ETOH H+ + + -

A H2O caliente

H2O fría

B CHCl3

Etanol al 70% C D CHCl3 H+ EtOH CHCl3

++ +

+ ++ ND

-

ND +/+/++ En concordancia con las discusiones se llegó a las siguientes conclusiones: 1.2.3.-

4.5.6.7.8.-

+

+/-

Se destaca la presencia de compuestos fenólicos, en los extractos hidroalcoholicos fracción A medio acuoso frio y ligeramente en un medio acuoso acido fracción E. Asimismo se confirma la presencia de triterpenos y/o esteroides solo en extractos hidroalcoholicos fracción B y ligeramente en la fracción D medio clorofórmico. También se destaca la presencia de leucoantocianidinas en los extractos hidroalcoholicos fracción A medio acuoso en caliente y con presencia dudosa en la fracciones D medio etanólico y fracción E medio acido. Y ligeramente presente en los extractos acuosos. Una presencia ligera de flavonoides tanto en los extractos acuosos y en extractos hidroalcoholicos fracciones A medio acuoso caliente y fracción B. En cuanto a alcaloides, por el reactivo de mayer dio indicios de la presencia de estos solo en los extractos acuosos ácidos, en las fracciones C medio acido y facción D. Se detectaron ligeramente la presencia de aminoácidos tanto en los extractos acuoso como en los extractos hidroalcoholicos fracción A medio etanólico. En cuanto a los taninos solo se detecto ligeramente en los extractos acuosos. Posiblemente se encuentren metabolitos secundarios denominados quinonas y cardiotónicos en los extractos acuosos.

RECOMENDACIONES

H+

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De acuerdo a los resultados y las conclusiones se recomienda: 1.Realizar ensayos para el aislamiento y elucidación de los metabolitos secundarios denominados compuestos fenólicos mediante extractos hidroalcoholicos, en un medio acuoso frio así como con solvente acuoso y acuoso acido . 2.Realizar ensayos para el aislamiento y elucidación de triterpenos y esteroides con solventes hidroalcoholicos, en un medio clorofórmico. 3.Realizar ensayos para el aislamiento y elucidación de los metabolitos secundarios denominados leucoantocianidinas con solventes hidroalcoholicos en un medio acuoso caliente y con solvente acuoso. 4.Realizar trabajos de investigación para el aislamiento y elucidación de los metabolitos secundarios denominados flavonoides con solvente acuoso e hidroalcoholico .

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