Cuestionario 12 Microbiologa 1 4c2371

CUESTIONARIO 12 1.

Es un parámetro que compara la actividad de un desinfectante dado con la del fenol y es utilizado para medir si un producto es más o menos eficiente para destruir microorganismos que el fenol *Determinación: consiste en poner dos series de tubos de ensaye diluciones deldesinfectante, del que va a probarse su capacidad antimicrobiana. Se ponen cantidadesmedidas de un cultivo bacteriano de Staphylococcus aureus (u otra bacteria deimportancia medica) en las dos series de tubos. Se obtienen muestras de cada tubu a los2, 10 y 15 segundos. Se determina entre la más alta dilución que inhibe el crecimiento bacteriano. Si al final inhibe a la bacteria a una dilución de 1:100 y el producto a probar lo inhibe a 1:200 quiere decir que es doble de fuerte que el fenol: mayor a uno son más activos, menor a uno son más débiles que el fenol. Un buen desinfectante debe tener índice fenólico superior a uno.

2.

Detergente: son humectantes y emulsivos, disminuyendo la tensión de dos líquidos no miscibles para formar una emulsión. Los detergentes aniónicos son bactericidas, perolos catiónicos son excelentes bactericidas (entre los cuales están los cuaternarios deamonio).

Por lo tanto los detergentes son mejores desinfectantes. 3.

4.

*Platinol: Farmaco que utiliza el ion platico como principio activo para tratamientos contra el cáncer. *Antiparasitario: La mayoría utilizan el antimonio como principio activo. *Concentracion y tiempo de exposicion: La concentración para obtener un determinado efecto, así como el rango de concentraciones en que se puede demostrar un determinado efecto, dependen de: -tipo químico del desinfectante, -tipo de microorganismos a eliminar, -método de ensayo del efecto. Existe una estrecha relación entre la concentración del agente y el tiempo necesario para matar una determinada fracción de la población bacteriana

*Temperatura: Normalmente, al aumentar la temperatura aumenta la potencia de los desinfectantes. Para muchos agentes la subida de 10 grados supone duplicar la tasa de muerte. Pero con el fenol, la subida de 10 grados representa multiplicar por 5 o por 8 la eficacia. *Ph: El pH afecta tanto a la carga superficial neta de la bacteria como al grado de ionización del agente. En general, las formas ionizadas de los agentes disociables pasan mejor a través de las membranas biológicas, y por lo tanto son más efectivos. -los agentes aniónicos suelen ser más efectivos a pH ácidos; -los agentes catiónicos muestran más eficacia a pH alcalinos. *Presencia de materiales extraños: La existencia de materia orgánica en el material a tratar afecta negativamente a la potencia de los desinfectantes de tipo oxidante (como los hipocloritos) y de tipo desnaturalizante de proteínas, hasta el punto que pueden llegar a hacerlos inactivos en cuanto a su poder desinfectante y/o esterilizante. Los principales mecanismos por los que se pierde actividad son: -adsorción (o sea, absorción superficial) del desinfectante a coloides de proteínas; -formación de complejos inertes o poco activos; -unión de grupos activos del desinfectante a proteínas extrañas. *Naturaleza del microorganismo y otros factores asociados a la población bacteriana: -Según la especie empleada: p. ej., el bacilo tuberculoso resiste los hipocloritos mejor que otras bacterias; -Según la fase de cultivo; -Dependiendo de la presencia de cápsulas o de esporas (suelen conferir más resistencia); -Número de microorganismos iniciales.

5.

6.

7.

8.

*Superficie o material a desinfectar *Tipo de microorganismos presentes (Resistencia innata)

9.

* Edad de los microorganismos *Numero y localizacion de los microorganismos * Debido a que las esporas poseen multiples capas que les permite sobrevivir a ambientes adversos, por lo tanto la presencia de estas estructuras de resistencia que poseen les confiere la capacidad de poder oponer resistencia a los métodos físicos para su eliminación y por ello solo pueden ser eliminadas por esterilización o con agentes químicos que poseen actividad esporicida. Ademas también suelen ser de difícil eliminación porque muchas esporas permanecen debajo de la superficie dentro de los poros pequeños, por lo cual tienen poco o con el agente quimico.

10.

*Cabello *Tortora *Murray *Ponce CUESTIONARIO 13 1.

recomendó su uso en forma rutinaria para la realización del antibiograma en medio sólido, debido a una serie de factores que se detallan a continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores

de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo.

2. La concentración mínima inhibitoria es importante en diagnósticos de laboratorio para confirmar la resistencia de microorganismos a un agente antimicrobiano y además para monitorizar la actividad de los nuevos agentes antimicrobianos

3.

*Eritromicina:

*Tetraciclina:

4. 5.

*Alteran la permeabilidad: -Polimixinas: Son polipéptidos catiónicos y básicos que actúan solamente sobre bacterias Gram negativas. Contienen una cola liposoluble, que se une a los fosfolípidos de la membrana, y una cabeza hidrofílica. Se comportan como detergentes catiónicos que desorganizan la superficie externa de la membrana celular modificando sus propiedades osmóticas por la alteración de los sistemas de transporte activo y la barrera de permeabilidad selectiva. -Imidazoles: Alteran la permeabilidad de la membrana celular provocando la filtración de iones K+ y compuestos con fósforo. Estos cambios en la membrana se deben a una interferencia en la síntesis de ergosterol del hongo por la inhibición de la enzima 14alfa-desmetilasa y la acumulación de 14-alfa-metilesteroles. Son agentes antimicóticos de amplio espectro, activos contra hongos, levaduras, ciertas bacterias y protozoarios. -Polienos: Son macrólidos y actúan selectivamente sobre microorganismos que contienen esteroles en la membrana (hongos, levaduras, micoplasmas, etc). Los polienos se unen a los esteroles provocando que la membrana sea permeable al K+ y a moléculas del tamaño de la glucosa a causa de la formación de poros.

6. Ver copias 7.

*Sulfonamidas: Las sulfamidas son bacteriostaticas, es decir, detienen el crecimiento de las colonias bacterianas. Son antagonistas del ácido paraminobenzoico, imprescindible para la síntesis del ácido fólico bacteriano. Los microorganismos que son susceptibles a las sulfamidas requieren del PABA extracelular para la producción del ácido dihidrofólico, un paso esencial en la producción de las purinas y la síntesis de ácidos nucleicos.6 Las sulfamidas actúan como análogos estructurales del PABA, inhibiendo competitivamente a la enzima dihidropteroato sintasa.5 Al bloquear la síntesis del ácido fólico, se inhibe el crecimiento y reproducción del germen. *Ceftriaxona: El anillo betalactámico es parte de la estructura de las cefalosporinas, por lo tanto, la ceftriaxona es un antibiótico betalactámico. El modo de acción de estos antibióticos es la inhibición de la síntesis de la pared celular de las bacterias, específicamente por unión a unas proteínas bacterianas llamadas "proteínas ligandos de la penicilina (PBPs). *Acido nalidixico: El ácido nalidíxico selectiva y reversiblemente bloquea la replicación del ADN bacteriano, por medio de la inhibición de la subunidad A de la enzima girasa del ADN induciendo la formación de un complejo enzimático ineficaz. Sus acciones también pueden causar que el empaquetamiento ultratorcional del ADN se vea relajado, causando inestabilidad en las moléculas genéticas.

8.

9.

10.

La asepcia en la toma de muestra, el uso de antibioticos antes de tomar la muestra, el manejo de la muestra o del sembrado, temperaturas adecuadas durante el cultivo

Componentes

del

medio

de

cultivo

Las propiedades que debiera tener un medio ideal para antibiograma son las siguientes:

1.

Debe

2.

permitir

Deben

el

crecimiento

estar

de

definidos

la sus

mayoría

de

los

componentes

patógenos básicos

3. Las pruebas de sensibilidad deben ser reproducibles con diferentes lotes del medio preparados por diferentes productores 4.

Debe

estar

libre

de

componentes

que

antagonicen

a

los

antimicrobianos

5. No debe sufrir oscilaciones importantes del pH durante el crecimiento de los microorganismos 6. Las versiones en caldo y sólida del medio debe tener la misma composición excepto en la presencia de un agente solidificante 7. Debe ser aproximadamente isotónico para las bacterias y permitir la adición de sangre cuando se requiere el estudio de microorganismos de difícil crecimiento Se han desarrollado una serie de medios químicamente definidos (SAAM: Synthetic Amino Acid Medium, DM: Defined medium ) que pretenden cumplir la mayor parte de las exigencias antes indicadas, aunque estos medios no se han popularizado. En un estudio en colaboración internacional se decidió la utilización del Mueller-Hinton (MH), por tener una buena reproducibilidad, la sencillez de su composición y su bajo contenido en ácido paraaminobenzoico, que antagoniza la actividad de las sulfamidas. También se utilizan en la actualidad los medios DST (Diagnostic Sensitivity Test ) e Isosensitest. Concentración

en

cationes

y

osmolaridad

Las concentraciones de Ca2+ y Mg2+ tienen un efecto importante en la actividad de los aminoglicósidos; en medios no suplementados con estos cationes pueden obtenerse valores de CMI falsamente bajos, sobre todo en Pseudomonas. Las concentraciones de Mg2+, Ca2+ y Fe2+ también influyen en la CMI de tetraciclinas. Éstas son más elevadas cuando el MH se suplementa con estos cationes. Los cationes monovalentes (Na+ y K+) afectan la actividad de bacitracina, ácido fusídico y novobiocina frente a Staphylococcus aureus y las de penicilinas frente a Proteus. El aumento de la osmolaridad del medio, condicionado por una alta concentración de ClNa, determina un aumento en la CMI de los aminoglicósidos. La detección de resistencia a meticilina en S. aureus se manifiesta con una concentración elevada de ClNa en el medio de cultivo; estas cepas se detectan fácilmente con la técnica de difusión con disco en agar tripticasa de soja con ClNa al 5 %.

Carbohidratos Los carbohidratos del medio de cultivo pueden influir en el tamaño de los halos de inhibición: en el método de difusión el almidón disminuye la zona de inhibición de Enterococcus faecalis con penicilina y ampicilina y aumenta la de Haemophilus influenzae con cefalosporinas. Sangre El medio de cultivo con sangre suele producir en la técnica de difusión con disco, diámetros menores y CMI más altas que el método de dilución en medio sólido. pH

del

medio

y

atmósfera

de

incubación

El pH del medio debería mantenerse próximo al pH fisiológico. Para algunos antimicrobianos los cambios de la CMI ocasionados por las variaciones del pH del medio entre 6 y 8 tienen importancia clínica; sobre todo con macrólidos y aminoglicósidos, más activos en un medio ligeramente básico, y las tetraciclinas y penicilinas que son más activas en un medio ácido. Sin embargo, las cefalosporinas se ven poco afectadas. La existencia de glucosa puede ocasionar una disminución del pH durante el crecimiento de cepas que la metabolizan, la adición de un tampón al medio determina alteraciones que afectan más la actividad de los antimicrobianos que los cambios de pH que se pretenden corregir. La atmósfera de incubación es importante para la estabilidad del pH del medio, sobre todo en el antibiograma en medio sólido debido a la gran superficie expuesta. La incubación en atmósfera de C02 tiende a disminuir el pH del medio de cultivo; en ella la CMI de aminoglicósidos y eritromicina es mayor que en atmósfera aerobia sin C02. Cuando el microorganismo requiera para su crecimiento atmósfera con C02 deben compararse los resultados de las cepas patrón en estas condiciones y en aerobiosis, paralelamente, para evitar errores de interpretación. Densidad

del

inóculo

El inóculo del antibiograma ha de ser lo suficientemente alto para detectar las tasas bajas de mutación hacia la resistencia en el microorganismo problema y no debe ser inferior al número de microorganismos que se encuentran normalmente en las infecciones clínicas. La densidad del inóculo es una de las variables más importantes, por ello debe ser cuidadosamente estandarizada para asegurar la reproducibilidad del antibiograma. El inóculo de las técnicas de dilución en caldo, en particular, puede plantear otros problemas; por ejemplo, las cepas de S. aureus resistentes a meticilina (MRSA) no se detectan con facilidad con un inóculo reducido. Se pueden observar discrepancias importantes en la CMI de S. aureus

productor de b-lactamasa cuando se empleen inóculos pequeños respecto a inóculos elevados. Para preparar el inóculo se aconseja ajustar la turbidez de un cultivo en caldo en fase de crecimiento activo con la del estándar 0,5 de McFarland (aprox. 10 e8 UFC/ml). Esta suspensión inicial debe ajustarse luego hasta conseguir un inóculo final de más o menos 5 x 10 e6 UFC/ml. Para los sistemas de microdilución se ajusta habitualmente la turbidez por nefelometría, siguiendo una posterior dilución en agua destilada o en caldo. También se puede preparar tomando 5 colonias, que se emulsionan en suero salino. Temperatura

y

tiempo

de

incubación

La temperatura óptima de incubación en la mayoría de los patógenos humanos es de 35 °C. Se ha comprobado que un aumento de la temperatura de 35 a 41,5 °C disminuye significativamente los valores de la CMI en un 20 % de los casos. Las subpoblaciones heterorresistentes a meticilina de S. aureus (MRSA) se detectan fácilmente a 30 °C y con dificultad a 37 °C. Para la detección de MRSA se ha propuesto prolongar la incubación durante 24 o 48 h.